TGR BioSciences Pty Ltd（TGR）是一家位于澳大利亚阿德莱德的私营公司。TGR成立于2001年，致力于为基于细胞的研究应用提供创新解决方案。我们的科学家拥有细胞生物学，生物化学和免疫测定设计方面的专业知识，并开发出高质量的产品和服务，这些产品和服务已成功应用于世界各地的药物发现计划。
TGR在其研发方面投入了大量资金，我们通过不断提供新的细胞检测方法来支持客户的研究工作，以检测疾病所依赖的细胞过程。TGR致力于营造持续学习和改进的氛围，以及高质量的技术支持，为我们的客户提供性能的产品。
为此，TGR凭借其获得专项的CaptSure™技术为其核心产品奠定了基础。这种创新的抗体固定系统提供了更快速，更简单的免疫测定，以及显着降低制造成本的好处。此外，我们开发了CaptSure™Multiplex，用于分析单个样品中的多个目标。除了在自己的产品中使用CaptSure™之外，TGR还与其他公司合作，根据许可安排访问该技术。
我们的旗舰免疫检测系列SureFire®是一系列用于分析细胞磷蛋白的检测试剂盒，由我们位于阿德莱德的工厂生产。SureFire和SureFire Ultra试剂盒通过PerkinElmer，Inc。（美国）分销，PerkinElmer，Inc。是实验室试剂的市场领先者。SureFire和SureFire Ultra检测器目前提供100多种SureFire试剂盒，可提供的工具箱，用于以均质形式测量内源性信号蛋白。
TGR的ELISAONE™是一种高灵敏度的免疫分析技术，无需标准ELISA应用所需的所有处理步骤即可提供快速结果。ELISAONE还为该平台带来了灵活性，允许用户使用标准读板器在单个96孔板上测量多个靶标。ELISAONE代表ELISA技术的下一代产品，现已通过我们的分销合作伙伴在美国和加拿大销售。
与PerkinElmer合作，我们自豪地推出AlphaSureFire®Ultra™ Multiplex检测产品组合，这是仅可用的磷脂蛋白多路检测平台，具有真正的同质性和高通量。虽然初的多重测定引入（MPSU试剂盒）仅包括用于测量磷酸化和总ERK或AKT蛋白的几个试剂盒，但是多重化试剂组的新添加允许从铕和一组铕中选择单个磷酸化靶标。基于铽的单独试剂并根据需要组合。这种拾取和包装功能允许科学家选择感兴趣的双重目标，以便在实验室中轻松实施。
Alpha SureFire Ultra Multiplex检测分为两类（1）Multiplex SureFire Ultra（MPSU）试剂盒和（2）Terbium SureFire Ultra（TBSU）试剂盒。MPSU试剂盒是用于磷酸化和*检测相同靶标的完整试剂盒，而TBSU试剂盒测量单个磷蛋白靶标，并且旨在与标准AlphaLISA SureFire Ultra试剂盒（ALSU）组合以评估第二个靶标。TBSU试剂盒允许在测定列表中对任何两种磷蛋白靶标进行拾取和包装组合，提供两种独立靶标的测量，具有大的选择灵活性。TBSU试剂盒将通过铽（Tb）受体珠报告目标，而ALSU试剂盒通过铕（Eu）AlphaLISA受体珠报告。
阿尔法 神火 ® 超 ™多重磷酸+总测定试剂盒和磷酸+磷酸测定试剂盒（刚刚发布）允许快速，灵敏，和定量地检测从细胞中磷酸化的，具有相同的蛋白质或总量的测量组合第二种磷蛋白。该Alpha Multiplex测量在相同的测定板孔中从单个细胞裂解物样品中进行，并且通过使用两种类型的Alpha受体珠实现，所述Alpha受体珠在不同波长（545nm和615nm）发射。
如下所示，两种不同的Alpha受体珠通过与特异性测定抗体的结合报告它们与不同抗原的结合。
单个目标 - Phospho + Total Assay试剂盒（MPSU试剂盒）
Alpha 615（铕）受体珠与靶蛋白上磷酸化位点的抗体直接缀合。Alpha 545（铽）受体珠子涂有Capt Sure™ 试剂，该试剂结合Capt Sure 标记的抗总靶蛋白抗体。Alpha供体珠结合生物素化的抗总靶蛋白抗体。
双靶分析试剂盒（将ALSU试剂盒与TBSU试剂盒结合使用）
ALSU试剂盒中的Alpha 615（铕）受体珠与Capt Sure TM 试剂抗体缀合至靶蛋白上的位点。TBSU试剂盒中的Alpha 545（铽）受体珠用新开发的Capt Sure2试剂抗体包被，该抗体结合 第二靶蛋白的Capt Sure2标记的抗靶抗体。Alpha供体珠子结合靶蛋白质1和2的两种生物素化抗体。
在存在靶蛋白的情况下，抗体使供体和受体珠子紧密接近，使得能够通过具有Alpha功能的读板器照射供体珠子时产生α信号。光发射量与样品中存在的目标蛋白质的量成正比。
Alpha技术消除了对费力技术的需求，例如Western印迹或常规ELISA。它是一种无需洗涤步骤的均相分析，结合较短的孵育时间和出色的重现性（较低的CV％），非常适合机器人自动化。
该测定法使用基于珠子的Alpha技术，并且需要能够读取双发射波长的Alpha技术兼容的读板器。
测量磷酸和总蛋白质目标：
用于测量磷酸+总ERK和磷酸+总AKT的MPSU试剂盒现已上市。这些试剂盒包含进行测定的所有试剂。
两种磷蛋白靶标的测量：
将ALSU套件与TBSU套件组合使用
ALSU试剂盒和TBSU试剂盒分别购买特定的磷酸化靶标，并结合测量所需的duoplex组合。TBSU试剂盒手册中提供了试剂盒组合的方案。
因此，可以选择超过900种可能的双磷蛋白组合用于该灵活系统的测量。这在下图中示意性地示出。
请联系PerkinElmer获取化验盒详细信息，AlphaPlex读数的读板优化以及当前套件组合的完整详细信息。
资源
示例数据 - MPSU套件
同时测量每个孔中的p-AKT（Ser473）和总AKT
将MCF-7细胞以200K / mL在200mL MEM + 10％FCS中铺板过夜。然后用MEM + 1％FBS中不同浓度的渥曼青霉素处理细胞2小时，然后用2.5mg / mL胰岛素刺激30分钟（每种条件n = 3）。将每个孔在100mL SureFire Ultra 裂解缓冲液中裂解，并使用Alpha SureFire Ultra Multiplex试剂盒同时测定10μL等分试样的每种裂解物的p-AKT 1/2/3（Ser473）和总AKT1 。
同时测量每个孔中的p-ERK和总ERK
将A431细胞以200K / mL在200mL MEM + 10％FCS中铺板过夜。然后将细胞血清饥饿2小时，然后用不同浓度的EGF刺激10分钟（每种条件n = 3）。将每个孔在100mL SureFire Ultra 裂解缓冲液中裂解，并使用Alpha SureFire Ultra Multiplex试剂盒同时测定10μL等分试样的每种裂解物的p-ERK和总ERK 。
示例数据 - 将ALSU套件与TBSU套件组合使用
双磷蛋白检测
用抑制剂处理后A431细胞中MEK1和ERK磷酸化的多重分析。 在用抑制剂处理然后刺激后，使用标准ALSU测定试剂盒测量磷酸化MEK1的水平，同时使用TBSU测定试剂盒测量磷酸化ERK水平。
MCF-7细胞中蛋白质磷酸化的多重分析。用mTOR抑制剂雷帕霉素处理细胞，然后用胰岛素刺激。通过ALSU和通过TBSU测量的p-AKT 1/2/3（Ser473）水平测量p-p70S6k（Thr389）的水平。
HeLa细胞蛋白磷酸化多重分析及总Cofiin标准化。
用EGF受体抑制剂AG1478预处理或不用EGF处理HeLa细胞。除去培养基，用1X SureFire Ultra裂解缓冲液裂解细胞。通过将用于p-ERK 的AlphaLISA SureFire Ultra（ALSU）测定试剂盒和用于Total Cofilin 的Terbium SureFire Ultra（TBSU）测定试剂盒组合制备多重受体混合物。
已经开发出Total Cofilin TBSU试剂盒，以允许使用ALSU试剂盒测量的所有磷蛋白靶标分析的duoplexed标准化。
TBSU检测试剂盒清单
AlphaScreen SureFire STAT3 (p-Tyr705) Assay Kit
Phospho-SYK (Tyr525/526) Terbium SureFire Ultra Detection Kit
Phospho-SMAD3 (Ser423/425) Terbium SureFire Ultra Detection Kit
Phospho-p70 S6K (Thr389) Terbium SureFire Ultra Detection Kit
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