QA-Bio是一家致力于提供糖基化研究工具的公司，所提供的糖基化研究产品涵盖糖苷内/外切酶，去糖基化没，唾液酸产品，多糖产品纯化试剂盒，多糖标记试剂盒等，同时提供多糖分析服务。

qa-bio E-PNG01说明书

产品编号：E-PNG01

内切糖苷酶

- 内切糖苷酶切割来自糖蛋白的完整聚糖 - 
清洁制剂中的高度稳定的酶 - 不含甘油，NaCl或其他添加剂，如EDTA。
- 测试所有酶不存在蛋白水解或意外的糖苷活性

内切糖苷酶是用于分析糖蛋白的广泛使用的酶。这些酶从糖蛋白释放完整的聚糖，而外切糖苷酶释放单个单糖（即唾液酸，半乳糖，β-N-乙酰基葡糖胺，甘露糖等）。

PNGase F通常包含在酶组中，因为其切割完整的N-连接聚糖具有相似的活性，尽管它实际上是酰胺酶。它在天冬酰胺氨基酸和N-连接聚糖的壳二糖核心的个β-N-乙酰葡糖胺糖（GlcNAc）之间切割。Endo F酶和Endo H在和第二GlcNAc之间切割N-连接的聚糖，留下带电荷的残基，其有助于增加去糖基化蛋白质的溶解度，降低蛋白质聚集体沉淀的可能性。PNGase F切割所有N-连接的聚糖，而Endo H和Endo F酶切除特定类型的N-连接聚糖。

酶的这种分类还包括O-糖苷酶，其从丝氨酸或苏氨酸氨基酸中除去核心1O-连接的聚糖（Galβ1,3GalNAcα）。通常，O-连接的聚糖含有在分支和线性连接中与半乳糖连接的另外的单糖，需要使用外切糖苷酶如唾液酸酶和半乳糖苷酶来除去额外的糖。

PNGase F.

PNGase F从糖蛋白切割N-连接（天冬酰胺连接的）寡糖。

产品编号 - 酶的量
E-PNG01 - 60μLs

E -PNG01-20 - 20μLs¹

E -PNG01-200 - 200μls²（以前的E-PNG05）
   ¹包括缓冲液，变性剂和Triton- 
   X²仅含酶

PNGase F，肽N糖苷酶F，N-糖苷酶，N-聚糖酶

PNGase F从糖蛋白切割N-连接（天冬酰胺连接的）寡糖。该酶将天冬酰胺脱氨基成天冬氨酸，使寡糖保持完整。变性增加了解理速率。大多数天然蛋白质仍然可以*N-去糖基化，但必须增加孵育时间。酶在反应条件（37℃）下保持*活性至少96小时。PNGase F不会去除植物糖蛋白上常见的含有α-（1,3） - 连接的核心岩藻糖的寡糖; 为此目的，使用肽N-糖苷酶A.

有许多替代酶可用于去除N-聚糖，特别是Endo F家族的酶和Endo H.这些酶切割寡糖核心中的两个N-乙酰氨基葡萄糖残基，产生截短的糖在天冬酰胺上残留一个N-乙酰氨基葡萄糖残基的分子。这留下带电荷的糖，其可以帮助将蛋白质保持在溶液中，所述溶液在用PNGase F去糖基化后沉淀，其去除了完整的寡糖。Endo F1切割高甘露糖和一些杂合型N-聚糖。Endo F2将去除双触角和高甘露糖（降低40倍速率）。Endo F3释放出triantennarry和岩藻糖基化的双触角N-聚糖。远藤H. 去除杂交或高甘露糖聚糖。

来源 Elizabethkingia miricola（是Chryseobacterium meningosepticum）

EC 3.5.1.52 
PDB 1PGS 
UniProt Q9XBM8

内容
PNG酶的F的20mM的Tris-HCl，pH 7.5中

包含20μL和60μL包装尺寸：
5x反应缓冲液7.5 - 250 mM磷酸钠，pH 7.5 
变性溶液 - 2％SDS，1Mβ-巯基乙醇
Triton X-100 - 15％溶液

比活度 > 25 U / mg

活性 5U / ml

分子量 36,000道尔顿

pH范围 6-10，适7.5

方案
1.将多200μg的糖蛋白添加到Eppendorf管中。用去离子水调节至35μl终体积。
2.加入10μl5x反应缓冲液7.5和2.5μl变性溶液。在100°C加热5分钟。
很酷。加入2.5μlTritonX-100并混合。
4.向反应中加入2.0μl酶。在37°C孵育3小时。

特异性切割所有天冬酰胺连接的复合物，杂交或高甘露糖寡糖，除非α（1-3）核心岩藻糖基化; 天冬酰胺必须在两个末端都是肽键合，Endo F游离

比活性定义为在37℃，pH7.5下在1分钟内催化从1微摩尔变性的RNase B释放N-连接的寡糖所需的酶量。通过SDS-PAGE监测切割（切割的RNase B迁移更快）。

储存在4°C下储存酶。

参考

- 拜耳，EA，F。De Meester，T。Kulik和M. Wilchek。去糖基化蛋清抗生物素蛋白的制备。 Appl Biochem Biotech 53： 1-9（1995）

- Elder，JH和S. Alexander。endo-bN-Acetylglucosaminidase F：来自Flavobacterium meningosepticum的内切糖苷酶，可裂解高甘露糖和复合糖蛋白。 Proc Natl Acad Sci USA 79： 4540-4544（1982）

- Tarentino，A .L。，CM Gomez和TH Plummer，Jr 。天冬酰胺连接的聚糖的去糖基化肽：N-糖苷酶 F.Biochemistry 24： 4665-4671（1985）

- Tarentino AL和TH Plummer。天冬酰胺连接的聚糖的酶促去糖基化：来自Flavobacterium meningosepticum的寡糖切割酶的纯化，性质和特异性。 Meth Enzymol 230： 44-57（1994）

- Trimble RB和AL Tarentino。鉴定在Flavobacterium meningosepticum中的不同内切糖苷酶（endo）活性：endo F1，endo F2和endo F3。Endo F1和endo H仅水解高甘露糖和杂合聚糖。 J Biol Chem 266： 1646-1 651（1991）

- Taga，EM，A。Waheed和RL Van Etten。来自杏仁的均相肽-N-糖苷酶的结构和化学表征。 生物化学23： 815-22（1984）

- Tarentino AL，Trimble RB，Plummer TH。用于研究糖蛋白的结构，合成和加工的酶促方法。 细胞生物学方法： 32：111-39（1989）

Anthony L.，Tarentino和Thomas H. Plummer Jr. 天冬酰胺连接的聚糖的酶促去糖基化：来自Flavobacterium meningosepticum的寡糖切割酶的纯化，性质和特异性。 酶学方法： 230：44-57。（1994）

- Tarentino AL，Plummer TH。寡糖对肽的可及性：N-蛋白质解折叠试剂促进的N-糖苷酶。生物化学杂志。257（18）：10776-80。（1982年）

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