上海起发FRT-PGK-gb2-neo-FRT-loxP说明书

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gene bridges A004

FRT-PGK-gb2-neo-FRT-loxP

Pro- and eukaryotic neomycin selection cassette flanked by FRT-sites and one additional downstream loxP site

原核和真核新霉素选择盒两侧有frt位点和一个额外的下游loxp位点。

• ID: A004

描述

设计PGK-gb2-neo-FRT-loxP模板以分别在原核和真核细胞中选择卡那霉素/新霉素。

它结合了用于在大肠杆菌中表达卡那霉素抗性的原核启动子（gb2）和用于在哺乳动物细胞中表达新霉素抗性的真核启动子（PGK）。原核启动子gb2是Em7启动子的略微修饰形式; 它比通常使用的Tn5启动子介导更高的转录效率。小鼠磷酸葡萄糖激酶基因（PGK）的启动子用作真核启动子。合成的多腺苷酸化信号终止卡那霉素/新霉素表达。盒子侧翼为FRT位点，以便随后通过Flp重组酶切除。另外的单个loxP位点位于盒的3'末端。*不是我和Xho我的位点位于盒子侧面，便于克隆限制性位点。使用提供的PCR模板，可以容易地产生侧翼为任何其他限制性位点的PGK-gb2-neo-FRT-loxP盒，以将盒克隆到所选择的载体中。可以通过在PCR引物中添加相应的序列来引入限制性位点。该模板可以容易地用于产生由Red / ET重组介导的靶向构建体。

PGK-gb2-neo-FRT-loxP模板不是线性的，而是基于质粒的（大小为3,485bp）。由于其R6K起源，质粒不能在大多数大肠杆菌菌株中复制。因此PCR产物可以直接用于下游应用而无需任何进一步纯化。使用每个反应1μl作为模板，可以进行至少20次PCR反应。

内容

• FRT-PGK-gb2-neo-FRT-loxP：PCR模板（50 ng/μl，20μl）

• 手册

序列

FRT-PGK-GB2-NEO-FRT-的loxP

FRT  启动子  neo ^R   loxP  终止子
 

AATTAACCCTCACTAAAGGGCGGCCGC GAAGTTCCTATTCTCTAGAAAGTATAGG AACTTC ATTCTACCGGGTAGGGGAGGCGCTTTTCCCAAGGCAGTCTGGAGCATGC GCTTTAGCAGCCCCGCTGGGCACTTGGCGCTACACAAGTGGCCTCTGGCCTCGCA CACATTCCACATCCACCGGTAGGCGCCAACCGGCTCCGTTCTTTGGTGGCCCCTT CGCGCCACCTTCCACTCCTCCCCTAGTCAGGAAGTTCCCCCCCGCCCCGCAGCTC GCGTCGTGCAGGACGTGACAAATGGAAGTAGCACGTCTCACTAGTCTCGTGCAGA TGGACAGCACCGCTGAGCAATGGAAGCGGGTAGGCCTTTGGGGCAGCGGCCAATA GCAGCTTTGCTCCTTCGCTTTCTGGGCTCAGAGGCTGGGAAGGGGTGGGTCCGGG GGCGGGCTCAGGGGCGGGCTCAGGGGCGGGGCGGGCGCCCGAAGGTCCTCCGGAG GCCCGGCATTCTGCACGCTTCAAAAGCGCACGTCTGCCGCGCTGTTCTCCTCTTC CTCATCTCCGGGCCTTTCGACCTGCAGCAGCACGTGTTGACAATTAATCATCGGC ATAGTATATCGGCATAGTATAATACGACAAGGTGAGGAACTAAACCATGGGATCG GCCATTGAACAAGATGGATTGCACGCAGGTTCTCCGGCCGCTTGGGTGGAGAGGC TATTCGGCTATGACTGGGCACAACAGACGATCGGCTGCTCTGATGCCGCCGTGTT CCGGCTGTCAGCGCAGGGGCGCCCGGTTCTTTTTGTCAAGACCGACCTGTCCGGT GCCCTGAATGAACTGCAGGACGAGGCAGCGCGGCTATCGTGGCTGGCCACGACGG GCGTTCCTTGCGCAGCTGTGCTCGACGTTGTCACTGAAGCGGGAAGGGACTGGCT GCTATTGGGCGAAGTGCCGGGGCAGGATCTCCTGTCATCTCACCTTGCTCCTGCC GAGAAAGTATCCATCATGGCTGATGCAATGCGGCGGCTGCATACGCTTGATCCGG CTACCTGCCCATTCGACCACCAAGCGAAACATCGCATCGAGCGAGCACGTACTCG GATGGAAGCCGGTCTTGTCGATCAGGATGATCTGGACGAAGAGCATCAGGGGCTC GCGCCAGCCGAACTGTTCGCCAGGCTCAAGGCGCGCATGCCCGACGGCGAGGATC TCGTCGTGACCCATGGCGATGCCTGCTTGCCGAATATCATGGTGGAAAATGGCCG CTTTTCTGGATTCATCGACTGTGGCCGGCTGGGTGTGGCGGACCGCTATCAGGAC ATAGCGTTGGCTACCCGTGATATTGCTGAAGAGCTTGGCGGCGAATGGGCTGACC GCTTCCTCGTGCTTTACGGTATCGCCGCTCCCGATTCGCAGCGCATCGCCTTCTA TCGCCTTCTTGACGAGTTCTTCTGAGCGGGACTCTGGGGTTCGAATAAAGACCGA CCAAGCGACGTCTGAGAGCTCCCTGGCGAATTCGGTACCAATAAAAGAGCTTTAT TTTCATGATCTGTGTGTTGGTTTTTTTTTTGGGGGGGG GAAGTTCCTATTCTCTAG AAAGTATAGGAACTTC AAGCTT ATAACTTCGTATAGCATACATTATACGAAGTTA TCTCGAGCCCTATAGTGAGTCGTATTA