M3009.0000
产品信息“ SNP Pol DNA聚合酶”
SNP Pol DNA聚合酶用于等位基因的简单，可靠和快速特异性分化，例如。CRISPR / Cas9点突变，检测不正确的CRISPR / Cas9产品，或验证测序结果。无论是否存在引物模板复合物不匹配，SNP Pol DNA聚合酶都能识别高度特异性。错配（点突变）必须在引物的3'末端。因此，突变等位基因可以与野生型等位基因*区分开- 无需测序，因为在错配的情况下聚合酶根本不会扩增。
只需将引物放在假定的点突变上（重要：点突变必须在3'末端），聚合酶将以100％的准确性检测该区域的错配：如果与引物3'末端互补的碱基在DNA上链显示突变而引物未显示，则没有扩增发生-快速100％确定！
因此，SNP Pol DNA聚合酶可轻松，省时且经济地用于筛选点突变。
SNP PolTaq DNA聚合酶变异体具有5'-3'核酸酶活性，因此可与特异性引物探针（如Taqman®探针或分子信标）一起使用。
一次性测试模式可享受*。在德国境内免运费！试用样品价格将在产品正式订购时退还。
描述
的SNP波尔DNA聚合酶（您好 GH 狄单核苷酸scrimination）是高度选择性的DNA聚合酶。它是专为需要较高区分率的等位基因特异性区分而设计的，例如等位基因特异性PCR（ASA），等位基因特异性引物延伸（AS-PEX），SNP分析，基因分型或甲基化特异性PCR（MSP）。许多DNA聚合酶可耐受错配的引物-模板复合物。另一方面，SNP Pol DNA聚合酶可以区分这些特异性（高区分度），并且仅特异性地提供引物对*匹配的PCR产物！Genaxxon SNP Pol和SNP PolTaq DNA聚合酶通过两个等位基因之间的等位基因特异性PCR差异高达100％，并且在简单的qPCR之后，可以清楚地说明存在哪些等位基因。
等位基因特异性PCR可用于定量野生型序列库或背景中的突变率。同样，可以通过等位基因特异性PCR和SNP Pol DNA聚合酶验证由NGS确定的突变频率。SNP PolTaq DNA聚合酶非常适合用于液体活检样品的分析。有了它，就可以很好地分析和量化癌症突变的存在和频率。
图片：应用实例SNP Pol DNA聚合酶
我们建议使用短扩增子（约60-200 bp）的引物以获得良结果。更长的扩增子也是可能的。
对于大于500 bp的较长扩增子，可能需要添加镁（+0.5-1.5mM）。
故障排除：
PCR 30个循环后无条带！
缺失或弱带的优化程序
-实时PCR方法
-检查dNTP浓度。这应该在200至300μM之间（在PCR中）。
-增加循环次数（至少35次，宜40次）
测试优化-
循环数在端点检测中，循环数30并不总是足以产生高度可见的条带。例如，以少于200个DNA拷贝为基线。因此，应该使用实时PCR运行测试，或者可以使用五个并行PCR，其中五个是在五个不同的循环后从PCR设备中提取的（以下示例）。
终点检测：
用SNP Pol DNA聚合酶并行进行五个相同的PCR反应。
分别在20、25、30、35和40个循环中，从循环仪中取出一个PCR管，后将所有五个反应加到琼脂糖凝胶上。
这样就可以很容易地看出，对于给定的应用（起始材料，靶标，引物），PCR中宜的循环数是多少。
带细胞裂解物的SNP Pol PCR
动物细胞和大肠杆菌可直接用于SNP Pol DNA聚合酶的PCR！不需要单独的裂解和蛋白酶K消化。
程序PCR方法：
1.每个PCR方法需要50-500个细胞！
2.用引物和缓冲液准备PCR混合物，并置于冰上！
3.将挑选的菌落直接倒入10-20μL水中（不进行单独的裂解，不进行蛋白酶K消化），
短暂涡旋（5秒），然后将该细胞悬液直接加入PCR反应中，例如将
10μL的细胞悬液用于PCR总体积接近20μL。2-3分钟的初始变性时间
就足够了，如果需要，可以延长至5分钟。
每个反应的大基因组DNA。100份相对较小，但仍然可以使用。
该细胞悬浮液的其余部分也可以冷冻掉以进行进一步测试。
可选：
4.如果可能：进行实时PCR！
SNP Pol DNA聚合酶（M3009>）或（M3061>）可与非特异性荧光染料（例如Genaxxon的Green DNA Dye>或SybrGreen®）一起用于实时PCR。当使用特定的PCR探针时，只能使用SNP PolTaq DNA聚合酶，因为只有这种酶才具有5'-3'核酸外切酶活性。
使用我们高质量的dNTP套装（M3015.4100和M3015.0250）或混合物（M3016.1010）>或我们的DNA标记>以及我们有利的标准琼脂糖>，我们为您提供PCR的其他产品。
SNP Pol DNA聚合酶的应用领域
-监测，验证和检测点突变
-鉴定正确或错误的CRISPR / Cas9产品
-验证/确认测序结果
-定量突变（例如NGS结果）
-通过等位基因检测SNP特异性扩增（ASA）/等位基因特异性PCR-
亚硫酸氢盐处理过的DNA（CpG甲基化侧）后的甲基化特异性PCR（MSP）
-HLA基因分型
-微测序
-带有水解探针的实时PCR-
实时多重PCR
- 线虫DAMID-SEQ数据。
Sharma R，Ritler D，Meister P.
秀丽隐杆线虫发育过程中核组织的DNA腺嘌呤甲基转移酶鉴定分析工具。创世纪。2016年2月4日。doi：10.1002 / dvg.22925。
-用SNPase DNA聚合酶进行SNP基因分型的小测序可通过以下步骤进行：
Lovmar L，Fredriksson M，Liljedahl U，Sigurdsson S，SyvänenAC。
通过微测序和微阵列的定量评估揭示了整个基因组扩增DNA的准确多重SNP基因型。Nucleic Acids Res。2003; 31：e129 。
-HiDi DNA聚合酶的等位基因特异性错配选择性
鼓M，Kranaster R，Ewald C，Blasczyk R，Marx A（2014）Thermus aquaticus DNA聚合酶的变体，具有在等位基因和甲基化特异性扩增中应用的增加的选择性。公共科学学报9（5）：e96640。DOI：10.1371 / journal.pone.0096640
