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targetingsystems蛋白质表达说明书

 更新时间:2021-08-05 点击量:460



targetingsystems蛋白质表达说明书


使用 Targefect-293F 高效转染 Free style 293 细胞 

获得高水平蛋白质表达的简单且经济的解决方案。 


Targefect-293F 是一种脂质体转染试剂,专为高效转染自由式 293 细胞和悬浮 CHO 细胞培养物而配制。 



转染方案


Targefect-293FS 试剂应在 -20 o C 下冷冻保存。在使用前将试剂解冻至室温。使用前将试剂全速涡旋 30 秒 2-3 次。


当 293S 细胞生长到足够高的密度(50ml 或更多时为 200 万个细胞/ml)时,继续准备它们以进行瞬时转染。 


取回两个 125 毫升康宁摇瓶。

添加足够的细胞和培养基,以 110 万个细胞/毫升的密度获得 27 毫升的体积。使用来自 Invitrogen 的 Freestyle 293 培养基或来自 Hyclone 的 Transfx-293 培养基。

将烧瓶置于 125rpm 和 8% CO2 的摇床培养箱中。

检索 GFP DNA 和 Targefect-293FS 试剂。在冰上解冻这两个组件。一定要剧烈涡旋脂质 30-60 秒。

取回两个 15 毫升锥形管。在每管中加入 1.5ml 来自 Invitrogen 的 OPTI-MEM 培养基。将一个标记为 DNA,另一个标记为脂质。

在 DNA 管中,添加 30ug GFP DNA 并通过轻弹管底部进行混合。如果您不确定 DNA 的无菌性,您可以使用注射器和针头通过 0.22 微米过滤器对其进行过滤。

在脂质管中,加入 30ul 的 Targefect-293FS Reagent 并剧烈涡旋混合物 30-60 秒。

让 DNA 和脂质混合物在室温下孵育 5 分钟。

在孵育结束时,将 DNA 混合物添加到脂质混合物中,然后轻弹管底部混合内容物。

让 DNA-脂质复合物在室温下形成 20 分钟。

在 20 分钟结束时,将 ~3ml 的 DNA-脂质混合物添加到两个 125ml 摇瓶中的一个。标记为 GFP 控制。向另一个摇瓶中加入 3ml OPTI-MEM 并标记为 Cell Only Control。

每个烧瓶中的最终密度应为 ~1x10^6 细胞/毫升。

约 48 小时后,GFP 对照烧瓶中的细胞中应出现明显的绿色荧光。5 天后,两个烧瓶之间应该有非常明显的区别。

在 5 天结束时收获两个烧瓶。将细胞降速并保存 sup。储存在 4 o C 直到需要。 


使用上述转染试剂转染效率已达到 90% 以上(使用 GFP 作为标记)。请联系技术支持以获取更多信息 1-866-620-4018 注意:对于转染 HEK-293 细胞,我们推荐使用Targefect-293 试剂



订购信息 

• Targefect-293F,目录 #293F-01,1ml --------------------- -- 170 美元

• Targefect=293F,目录 #293F-10,10 毫升 --------------------------------- 1250 美元