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Ludger Tag聚糖的全甲基化

 更新时间:2021-11-23 点击量:747


Ludger Tag 聚糖的全甲基化

MALDI-MS 分析聚糖可提供质量组成数据,并且比 UHPLC 技术更快(平均一个样品只需 1 分钟的数据采集时间),但唾液酸化聚糖通常更难分析,因为唾液酸部分不稳定. 全甲基化是用于 MALDI-MS 检测的碳水化合物衍生化的流行技术,因为它提高了电离效率,稳定了唾液酸并有助于连锁分析研究。然而,用于全甲基化的传统技术速度慢、劳动强度大,因此不适合高通量样品分析。

我们开发了一种简单易用的 LudgerTag 试剂盒,用于全甲基化聚糖,LT-PERMET-VP96。该套件可用于使用手动方法或适用于液体处理机器人的自动方法处理 1-96 个样品。它适用于 N-或 O-聚糖,一旦全甲基化,它们可以通过 MALDI-TOF-MS 或 LC-MS 进行分析。

我们已经验证了这项技术,并证明糖谱分析数据是可靠的,可与金标准 HILIC UHPLC 方法相媲美。该技术已用于 Ludger 的一系列高通量研究(使用自动全甲基化样品制备时间低于 5.5 小时,可处理 96 个样品)。

聚糖标准品

Ludger 拥有一系列适用于不同应用的系统适用性标准、过程控制和参考标准,包括唾液酸、单糖、聚糖分析和表征的分析。我们提供各种未标记的 N-聚糖 (N)、O-聚糖 (O)、寡糖、糖蛋白/糖肽和聚糖文库标准品。此外,我们的标准品目录还包括用 2-氨基苯甲酰胺 (2-AB)、2-AA(2-氨基苯甲酸)、普鲁卡因酰胺、8-氨基芘-1,3 荧光标记的各种 N- 和 O- 聚糖标准品,6-三磺酸 (APTS) 和全甲基化聚糖标准品。我们还提供 Ludger BioQuant 品牌下的定量聚糖和糖肽标准品。

精心设计的分析策略的一个关键组成部分是包含标准。下面的标准品表显示了哪些标准品可用于唾液酸、单糖、N-聚糖和/或 O-聚糖分析过程中的最佳实践。
这些分为以下几类;

  1. 系统适用性标准使分析人员能够测试分析系统(例如色谱、质谱和/或 CE)的整体功能并评估其是否适合其预期用途。


  2. 流程标准或流程控制用于验证部分或整个流程是否正常运行。糖分析中的过程标准有四个主要类别:释放、标记、释放后标记和外切糖苷酶测序


  3. 参考标准允许通过比较来表征。这可以通过将未知物的色谱或电泳保留时间与结构已*表征的标准物的色谱或电泳保留时间直接比较来实现。此外,未知结构的主要分配可以通过将它们的 GU(葡萄糖单位)值(使用葡萄糖均聚物 (GHP) 标准获得)与 GU 值在数据库或文献中的聚糖进行比较来完成。


  4. 定量聚糖标准品用于确定样品中分析物的绝对量。它们还可用于量化流程的效率。


  • N-聚糖命名表


可用的 N-聚糖存在于大多数生物和生物制药糖蛋白中,可分为以下几类:低聚甘露糖,以及岩藻糖基化、唾液酸化和二、三和四天线的复合聚糖。聚糖可作为具有游离还原末端(醛醇)或化学衍生的分子获得。N-聚糖的常见化学衍生物是荧光标记的糖苷(2-AA、2-AB、APTS、普鲁卡因酰胺等)或全甲基化聚糖。

天然聚糖通常适用于使用带有荧光标签的还原胺化或进行全甲基化或乙基酯化等衍生化的标记方法的过程控制。


A4 家族聚糖


NA4 聚糖 (A4G4)

CN-NA4-10U(大小:10μg)和-20U(大小:20μg)

含有末端半乳糖残基的四触角 N-聚糖。
m/z:2370.8566

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NGA4 聚糖 (A4)

CN-NGA4-10U(尺寸:10μg)和-20U(尺寸:20μg)

含有末端 N-乙酰氨基葡糖残基的四触角 N-聚糖。
m/z:1722.6453

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A3 家族聚糖


A3 聚糖 (A3G3S3)

CN-A3-10U(尺寸:10μg)和-20U(尺寸:20μg)

含有末端唾液酸残基的三天线 N-聚糖。
m/z:2879.0106

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NA3 聚糖 (A3G3)

CN-NA3-10U(大小:10μg)和-20U(大小:20μg)

含有末端半乳糖残基的三角 N-聚糖。
m/z:2005.7244

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NGA3 聚糖 (A3)

CN-NGA3-10U(尺寸:10μg)和-20U(尺寸:20μg)

含有末端 N-乙酰氨基葡糖残基的三触角 N-聚糖。
m/z:1519.5659

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A2F 家族聚糖


A2F 聚糖(FA2G2S2、G2FS2)

CN-A2F-10U(尺寸:10μg)和-20U(尺寸:20μg)

双天线 N-聚糖,包含末端半乳糖残基和核心 GlcNAc 上的岩藻糖基化。
m/z:2368.8409

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A1F 聚糖 (FA2G2S1, G2FS1)

CN-A1F-10U(尺寸:10μg)和-20U(尺寸:20μg)

含有末端唾液酸残基的双天线 N-聚糖和核心 GlcNAc 上的岩藻糖基化。
m/z:2077.7455

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NA2F 聚糖(FA2G2、G2F)

CN-NA2F-10U(尺寸:10μg)和-20U(尺寸:20μg)

双天线 N-聚糖,包含末端半乳糖残基和核心 GlcNAc 上的岩藻糖基化。
m/z:1786.6501

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NGA2F 聚糖 (FA2, G0F)

CN-NGA2F-10U(尺寸:10μg)和-20U(尺寸:20μg)

双天线 N-聚糖,包含末端 N-乙酰氨基葡糖残基和核心 GlcNAc 上的岩藻糖基化。
m/z:1462.5444

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FA2G1 聚糖 (G1F)

CN-FA2G1-10U(大小:10μg)和-20U(大小:20μg)

含有一个末端半乳糖残基和核心 GlcNAc 上的岩藻糖基化的双触角 N-聚糖。
m/z:1624.5973

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A2 家族聚糖


A2 聚糖(A2G2S2、G2S2)

CN-A2-10U(尺寸:10μg)和-20U(尺寸:20μg)

含有末端唾液酸残基的双天线 N-聚糖。
m/z:2222.7830

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A1 聚糖(A2G2S1、G2S1)

CN-A1-10U(尺寸:10μg)和-20U(尺寸:20μg)

含有一个末端唾液酸残基的双天线 N-聚糖。
m/z:1931.6876

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A2G1 聚糖 (G1)

CN-A2G1-20U(大小:20μg)

含有一个末端半乳糖残基的双天线 N-聚糖。
m/z:1478.5393

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NA2 聚糖 (A2G2, G2)

CN-NA2-10U(大小:10μg)和-20U(大小:20μg)

含有末端半乳糖残基的双天线 N-聚糖。
m/z:1640.5922

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NGA2 聚糖 (A2, G0)

CN-NGA2-10U(尺寸:10µg)和-20U(尺寸:20µg)

含有末端 N-乙酰氨基葡糖残基的双天线 N-聚糖。
m/z:1316.4865

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低聚甘露糖聚糖


Man-9 聚糖

CN-MAN9-10U(尺寸:10μg)和-20U(尺寸:20μg)

具有 9 个甘露糖残基的低聚甘露糖 N-聚糖。
m/z:1882.0634

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Man-8 聚糖

CN-MAN8-10U(尺寸:10μg)和-20U(尺寸:20μg)

具有 8 个甘露糖残基的低聚甘露糖 N-聚糖。
m/z:1720.5919

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Man-7 聚糖

CN-MAN7-10U(尺寸:10μg)和-20U(尺寸:20μg)

具有 7 个甘露糖残基的低聚甘露糖 N-聚糖。
m/z:1558.5391

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Man-6 聚糖

CN-MAN6-10U(尺寸:10μg)和-20U(尺寸:20μg)

具有 6 个甘露糖残基的低聚甘露糖 N-聚糖。
m/z:1396.4863

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Man-5 聚糖

CN-MAN5-10U(尺寸:10μg)和-20U(尺寸:20μg)

具有 5 个甘露糖残基的低聚甘露糖 N-聚糖。
m/z:1234.4334

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M3N2 聚糖 (Man-3)

CN-M3N2-10U(尺寸:10μg)和-20U(尺寸:20μg)

具有 3 个甘露糖残基的低聚甘露糖 N-聚糖。
m/z:910.3278