78R180 Red Retrobeads™ IX (100 µl)
产品概述
RetroBeads Gamma Lumafuor是lumafuor公司第一款反向示踪产品，也是唯1被证明有效的产品（该产品的有效性已被从无脊椎动物到无脊椎动物的数百篇研究论文证实）。
类别：产品内容
Cas ：78R180
大小：100微升
品牌：lumafluor
示踪产物体内注射浓度高，不易扩散，信号强，对活细胞或活体无毒，存活时间一年以上。它与以下大多数示踪剂、原位杂交检测技术和免疫组织化学技术兼容。
部分产品信息如下：
红色逆转珠（100μl）
绿色逆向珠IX （100 μl）
红色逆转录珠伽玛IX（100μl）
本手册总结了使用荧光乳胶微球（珠子）作为神经元逆行示踪剂的大多数程序。有关绿色珠子的信息，请参阅本手册的末尾。有关更多详细信息，请参阅Katz，L.C的以下论文
1.Katz，L.C.，Burkhalter，A.和Dreyer，W.D.荧光乳微球逆行神经元Markerforinvivoandinvitros tudiesofvisual cortex.自然310 ：498-500（1984）
2.卡茨，L.C.和Iarovici，D.M.绿色荧光光层：新的逆行示踪剂。神经科学34 ：511-520（1990）
鲁马福尔高效复古珠操作说明
1、 包装和稀释：
Lumafuor的珠子被包装在一个密封的小瓶中，浓缩的珠子悬浮在蒸馏水中。如果使用红色磁珠作为神经通路的反向示踪，则推荐使用稀释方法：1：4稀释可用于大鼠视觉皮层，而不会降低磁珠荧光标记的强度和质量。但是，对于第一个实验，我们不建议使用稀释的磁珠，而是使用原始溶液进行注射示踪。除蒸馏水外，NaCl和KCl等常规盐溶液也可用作稀释剂。如果使用绿色珠子，强烈建议使用不稀释的储备溶液。
2、 储存：
为避免蒸发，珠子溶液应在冰箱中储存4度。不要冻结它！冷冻豆子将无用且无法使用。干燥的珠子也不能使用（不能重新悬浮），产品没有明显的使用寿命。如果需要存储，它可以存储数年。
3、 注射：
珠子最好使用压力注射，如1ml汉密尔顿微注射器或气动注射系统。如果需要小面积显微注射（30-50nl），可以使用末端直径为30-50um的玻璃电极进行注射，而直径较大的玻璃电极可用于常规反向示踪（注射体积0.1-0.3ul）。然而，即使在较高剂量下，磁珠也不会从注射部位显着扩散（通常小于1mm）。因此，为了尽可能完quan地标记投射到更大细胞核的神经元，需要多点注射。虽然磁珠带负电，但不建议使用离子渗透法追踪磁珠。
4、 生存时间：
在大多数恒温脊椎动物系统中，检测磁珠的最短有效时间为24小时。在48小时内，标记强度随进样时间增加，48小时后荧光强度保持不变。在冷血动物中，检测珠子的推荐时间为1周。目前，尚未检测到最长的珠子可检测周期。然而，磁珠的荧光强度和质量可以在体内保持至少14个月不变，并且细胞可以被永jiu标记。在动物或神经元中没有发现珠子的毒性作用。
五、固定与治疗：
标准的固定方法是：洗涤或灌注0.1mpbs并固定在4%多聚甲醛（0.1mpbs制剂，pH7.4）中。用戊二醛固定会产生大量的组织自发荧光，这会阻碍用珠子标记的神经元。而且，在戊二醛固定组织中不会完quan观察到绿色珠子，因此应尽可能避免。如果使用冷冻部分，则应用PBS冲洗切片并用明胶涂层载玻片干燥。风干后，载玻片应用二甲苯透明1分钟，然后用氟镶或氪密封。氟卡特可以从atomrgic chemetals Corp.（纽约法明代尔）购买;克里斯塔隆可以从以下位置购买
Harleco（EM Industries，新泽西州吉布斯敦）。切片只能短时间暴露在乙醇或二甲苯中，但长期暴露（超过 5 分钟）会损坏珠子。磁珠对甘油非常敏感，在甘油环境中会很快提取荧光。因此，不应使用甘油密封剂。如果不可避免，可以使用水杨酸甲酯代替甘油作为密封剂。如果切片储存在黑暗环境中，则用荧光珠标记的细胞一年内无法提取（但切片的荧光背景会增加）。到目前为止，还没有珠子标记组织涂有塑料材料的记录。
观察：
红色珠子中的染料是罗丹明，因此可以使用所有与罗丹明匹配的荧光滤光片。尼康公司的一些老式罗丹明滤光片由于背景较高，可能无法观察到荧光珠。一般来说，蔡司和莱茨的标准罗丹明过滤器可以获得更好的观察效果。大多数绿色荧光滤光片都能很好地观察绿豆的荧光结果。将滤光片设置为荧光黄色可以获得强烈的明亮荧光，但也带来了很高的背景干扰。结果表明，比窄带滤光片更宽波段的荧光滤光片可以获得更强的荧光信号。经过长时间的观察和拍照，珠子的荧光没有
