AHARIBO Protein System 360：解析新生蛋白质合成动态，开启精准研究新时代

产品名称: AHARIBO PROTEIN System 360 (12 rxns)

品牌: immaginabiotech

规格：12 rxns

适用物种：真核细胞系

起始量：10万细胞

介绍：用于快速分离和分析新合成蛋白质。通过AHARIBO Protein 360技术，您可在活跃的翻译过程中使用叠氮高丙氨酸（AHA）标记新生蛋白质，并利用磁珠进行分离。随后，只需将样本寄送至我方实验室，我们将通过液相色谱-质谱联用（LC-MS）技术进行鉴定。数周内，您将收到一份综合报告，其中包含样本中检测到的所有新合成蛋白质的详细信息。

操作流程：

1、样本制备

无甲硫氨酸培养基培养 -> AHA标记 -> 细胞裂解。

2、蛋白质下拉实验

磁珠孵育 ->磁珠洗涤。

3、肽段定量与鉴定

磁珠酶解 ->LC-MS->数据分析。

概念验证研究

AHARIBO蛋白360成功分离AHA标记肽段

AHA标记K562细胞（AHA+）与未标记细胞（AHA-）的下拉效率对比

在LC-MS生成的谱图中，AHA+样本显示出显著的信号富集，证实AHARIBO介导的下拉技术对AHA标记肽段具有高度特异性。

案例研究：

Torin 2治疗应用

Torin 2作为mTOR通路抑制剂，通过阻断mTOR激酶活性调控蛋白质合成。本研究采用AHARIBO蛋白技术检测Torin 2诱导的翻译抑制效应：将K562细胞分为实验组（AHA孵育期间添加100 nM Torin 2处理1小时）与对照组（仅AHA孵育），经肽段下拉技术富集AHA标记的新合成肽段后，通过LC-MS进行定量蛋白质组学分析。

应用方向

1.蛋白质合成机制研究

动态追踪疾病模型（如癌症、神经退行性疾病）中新生蛋白的时空表达特征。

验证mRNA翻译效率差异，解析非编码RNA对蛋白质合成的调控作用。

2.药物靶点发现与验证

筛选小分子化合物对特定通路蛋白合成的抑制/激活效应（如抗癌药物对癌基因产物合成的阻断）。

监测抗体药物诱导的B细胞受体（BCR）信号通路相关蛋白的快速合成。

3.翻译后修饰（PTM）分析

结合磷酸化蛋白质组学，研究激酶活性与新生蛋白磷酸化的协同调控。

探索新生蛋白的糖基化修饰模式对免疫原性的影响（如疫苗研发）。

4.病毒学与感染机制

定量宿主细胞在病毒感染后的抗病毒蛋白（如干扰素诱导蛋白）合成动力学。

鉴定病毒劫持宿主翻译机器的关键宿主因子（如新冠病毒的ORF1ab蛋白相互作用网络）。

5.合成生物学与蛋白质工程

优化人工合成基因的翻译效率，筛选高表达工程蛋白的宿主细胞系。

研究稀有密码子对新生蛋白折叠速率的影响（如荧光蛋白变体的快速筛选）。

注意事项

1.实验安全规范

试剂盒含同位素标记成分（如L-赖氨酸-¹³C₆¹⁵N₂），需严格遵守放射性/稳定性同位素操作规程，避免交叉污染。

实验区域应配备通风橱及专用耗材，废弃物需按生物危害品处理。

2.样本适用性限制

仅支持真核细胞系（如HEK293、Jurkat等），不适用于原代细胞、组织样本或微生物（除非提前验证）。

细胞活性需＞80%，避免使用冻存或凋亡细胞，以免影响标记效率。

3.操作关键控制点

严格遵循代谢标记时间窗口（通常为4-6小时），过长可能导致代谢平衡破坏。

磁珠纯化步骤需充分震荡混匀，避免因结合效率不足导致假阴性结果。

4.数据分析前提条件

需提供细胞培养基成分说明（如是否含血清），避免外源性肽段干扰。

建议同步设置阴性对照（未标记细胞）和阳性对照（已知高表达蛋白），提升数据可信度。

5.法规与兼容性

数据仅限科研用途，若涉及临床样本需另行伦理审批。

兼容主流质谱仪（如Thermo Orbitrap、AB Sciex TripleTOF），但需提前确认仪器参数适配性。

常见问题

Q1：系统是否适用于原代细胞或临床样本？

A：当前版本主要针对永生化真核细胞系（如HEK293、HeLa）优化。若需扩展至原代细胞或组织样本，需提前联系技术团队评估可行性。

Q2：LC-MS分析是否需要额外付费？

A：12次反应套餐已包含基础LC-MS服务（含数据报告）。如需高分辨率质谱（如Orbitrap）或深度覆盖分析，可升级套餐（报价详询销售）。

Q3：如何保证实验数据的准确性？

A：系统内置三重质控：

同位素标记效率验证（CV<5%）；

阳性对照肽段（如β-actin）内参校正；

数据库匹配率阈值设定（≥95%置信度）。

Q4：是否支持多组学联合分析？

A：可与转录组、磷酸化蛋白质组数据整合，提供定制化多组学分析报告（需额外付费）。

注：该说明仅供参考，最终请immaginabiotech品牌说明书为准。

如有任何疑问，欢迎联系咨询：“上海起发"！

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