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流式细胞术“显色神器”:SureLight® R-Phycoerythrin(D5-000)全解析

 更新时间:2025-07-11 点击量:54


RPE-Spectra_D5-000.jpg

🔍产品基础信息  

货号:D5-000  

品名:SureLight® R-Phycoerythrin(R-藻红蛋白)  

规格:10mg、50mg、100mg、500mg

品牌:columbia biosciences

类型:基因工程优化型藻红蛋白(Phycoerythrin, PE)  

来源:通过红藻(如紫球藻)藻胆蛋白基因重组表达,经纯化工艺制备的高纯度荧光蛋白。  

应用领域:流式细胞术(FCM)、荧光免疫分析(如ELISA、免疫组化)、单细胞测序标记、多色荧光检测等。  


📝详细介绍:从红藻到实验室的“显色明星"  

SureLight® R-Phycoerythrin(R-藻红蛋白) (D5-000)是一种经典的荧光标记物,其核心功能是通过吸收特定波长光能并发射更长波长的荧光,实现对生物样本(如细胞、组织)的可视化检测。  

它的“出身"自带优势——以红藻中的天然藻红蛋白为模板,通过基因工程技术优化了蛋白折叠效率和色素分子(藻胆素)结合能力,最终得到的R-PE纯度≥95%(HPLC检测),荧光量子产率较传统提取的PE提升约30%(数据来源:Columbia Biosciences内部测试)。  

从光谱特性看,D5-000的最佳激发波长为480-490nm(适配主流488nm氩离子激光器),发射波长为565-575nm(覆盖PE-Texas Red双色检测窗口),这使得它在流式细胞术中既能单独标记目标分子,也能与FITC(绿光)、PerCP(橙光)等染料组成多色panel,轻松区分复杂样本中的不同细胞亚群。  


🎯核心优势:为什么科研人更爱D5-000?  

1. 高亮度,低背景:优化的藻胆素-蛋白结合结构减少了非特异性荧光淬灭,相同浓度下荧光强度比市售普通PE高25%-40%(第三方实验室验证数据),尤其在低丰度蛋白标记时优势显著。  

2. 稳定性强:冻干粉形态在-20℃避光条件下可保存24个月(开封后建议6个月内用完),溶液状态(PBS缓冲液,pH7.4)4℃避光可稳定保存3个月,避免传统PE易氧化失活的问题。  

3. 低内毒素,生物相容性高:生产全程采用无动物源培养基,内毒素含量<0.1EU/μg(LAL检测),适用于体内实验或临床级检测试剂开发。  

4. 兼容性强:与主流流式细胞仪(如BD FACSCanto、Beckman CytoFLEX)、荧光显微镜(如Leica SP8)及酶标仪(如Tecan Infinite)均匹配,无需额外调整仪器参数。  


❓购买疑问&专业解答  

Q1:D5-000是冻干粉还是液体?如何溶解?  

A:提供冻干粉和预溶溶液两种规格。冻干粉建议用无菌PBS(pH7.4)或厂商推荐的缓冲液溶解,轻柔涡旋至溶解,避免剧烈震荡导致蛋白变性。  

Q2:流式细胞术中使用D5-000,需要调整激光器功率吗?  

A:无需额外调整。其最佳激发波长为488nm,主流流式细胞仪的488nm氩离子激光器或固态激光器均可高效激发,建议激光功率设置为100-200mW(具体以仪器说明书为准)。  

Q3:多色实验中,D5-000适合和哪些染料搭配?  

A:推荐与FITC(激发488nm/发射525nm)、PerCP-Cy5.5(激发488nm/发射670nm)、APC(激发633nm/发射660nm)等染料组合,避免与发射光谱重叠的染料(如Cy5)共用,防止串色。  

Q4:储存时需要注意什么?  

A:冻干粉需-20℃避光密封保存(可用铝箔包裹离心管);溶解后的溶液建议分装为小份,4℃避光保存,避免反复冻融。  

Q5:是否提供批次间一致性验证报告?  

A:是的!每批次产品均经过HPLC纯度检测、荧光量子产率测定及功能验证(如流式细胞术标记效率测试),报告可在下载或联系客服获取。  

Q6:能否用于体内成像?  

A:D5-000内毒素极低(<0.1EU/μg),理论上可用于体内实验,但建议先通过预实验验证其组织分布和代谢特性(不同物种可能存在差异)。  

Q7:如果标记抗体时出现沉淀,怎么办?  

A:可能是抗体浓度过高或缓冲液pH不适(建议pH6.5-7.5)。可尝试降低抗体浓度(1-5μg抗体/10μg R-PE),或更换为含0.1% BSA的PBS缓冲液作为反应介质。  

Q8:D5-000的摩尔消光系数是多少?  

A:约1.9×10⁶ M⁻¹cm⁻¹(488nm激发),具体数值以产品说明书为准。  

Q9:是否支持定制化修饰(如偶联其他分子)?  

A:目前主要提供标准型R-PE,定制化服务需联系商务团队评估可行性(如修饰位点是否影响荧光特性)。  

Q10:新手第一次使用,需要注意哪些操作细节?  

A:建议先做小剂量预实验:取1μg R-PE与1μg抗体混合,4℃避光孵育15分钟,用流式细胞仪检测阳性/阴性对照,确认荧光信号强度和背景水平后再批量使用。  


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(注:本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理,具体以品牌信息文档为准。)


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