Creative Diagnostics：用于基因治疗的AAV（重组腺相关病毒）介绍

概述

重组腺相关病毒（rAAV）已成为体内基因治疗的主要递送平台。rAAV基因疗法药物Glybera（Alipogene Tiparvovec，由uniQure公司研发）于2012年获欧洲药品管理局（EMA）批准，用于治疗脂蛋白脂肪酶缺乏症。2018年，FDA批准了在美国上市的rAAV基因疗法Luxturna（Voretigene neparvovec-rzyl）。

(图1：rAAV介入性基因治疗临床试验概览，引用自Wang, D.等人2019年的研究)

AAV载体基础

AAV属于细小病毒科依赖病毒属，是一种无包膜的小型DNA病毒，基因组大小约为4.7 kb。AAV载体是基于AAV基因组改造的基因递送工具。

•   基因组结构：两端含有反向末端重复序列（ITR），其中D序列与病毒基因组的高效释放、选择性复制和包装密切相关；编码区包含两个开放阅读框，分别编码4种Rep蛋白（负责基因组复制）和3种Cap蛋白（负责病毒组装与包装）。

•   载体设计：在设计载体时，需要将编码区替换为靶基因及相关功能片段，仅保留两端的反向末端重复序列。

•   生产方式：通常采用三质粒共转染法，即将包含AAV载体基因组的质粒、腺病毒辅助基因质粒、以及表达CAP和REP蛋白的质粒共同转染细胞。

•   血清型：目前已发现13种AAV血清型（AAV1至AAV13），它们可以靶向不同的受体和组织。在制备载体时，需要根据疾病部位和靶组织选择合适的血清型。

AAV载体在基因治疗中的应用

•   基因替换：通过将治疗基因递送至靶细胞，利用染色体同源重组替代功能缺陷的基因。这主要适用于隐性单基因遗传病。

•   基因编辑：参与DNA修复过程，递送包含靶序列同源重组臂和治疗基因的基因组，通常还会与Cas9蛋白编码序列共同递送，用于直接修复致病的基因突变。

•   基因沉默：以RNA干扰（RNAi）为核心机制，在mRNA水平上调控基因表达，从而下调致病基因的表达。

•   基因添加：通过补充功能性基因来治疗复杂的遗传病或获得性疾病。除了单基因病外，该策略已在对HIV感染的临床测试中展开。

AAV的免疫原性

1. 野生型AAV预存免疫

人类普遍存在针对野生型AAV的免疫记忆。

•   体液免疫：约有30%-60%的人群携带抗AAV2中和抗体。由于不同血清型的衣壳氨基酸序列和结构高度同源，导致中和抗体之间存在广泛的交叉反应。

•   细胞免疫：可以通过ELISPOT和流式细胞术检测到针对AAV1和AAV2的特异性T细胞。这类T细胞具有记忆表型，在脾脏等外周免疫器官中更为常见，且在成人和儿童中的检出水平相似。

2. AAV载体诱导的免疫应答

•   先天免疫：载体的核酸成分会通过病原体相关分子模式（PAMP）被免疫细胞的模式识别受体（PRR）识别，进而激活NF-κB和IRF转录因子，诱导促炎细胞因子或I型干扰素的表达，可能引发炎症反应。

•   适应性免疫：抗原提呈细胞（APC）提呈衣壳蛋白表位，激活CD8⁺细胞毒性T细胞和CD4⁺辅助T细胞，介导体液免疫和细胞免疫应答。这会导致细胞毒性T细胞清除被AAV转导的细胞，引起靶器官炎症，从而降低基因转移的持续时间和疗效。

3. 转基因产物的免疫应答

免疫原性受到宿主因素（如基础疾病、遗传背景）和载体因素（如靶器官、启动子的组织特异性）的共同影响。相比免疫豁免器官（如肝脏）的局部给药，全身或肌肉注射载体的免疫原性显著更高。

AAV免疫检测

AAV载体的免疫原性是临床应用的核心障碍之一，需要通过基线免疫参数检测来指导治疗方案。

•   检测方法：包括体外细胞转导抑制（TI）试验、小鼠体内TI试验，以及基于ELISA的抗衣壳总抗体（TAb）检测。

•   产品支持：创迪诊断提供全系列的AAV抗体（可识别完整病毒衣壳、病毒亚基及复制酶），以及多血清型的AAV滴度ELISA试剂盒。

核心产品列表

AAV抗体

•   DMAB6350：抗AAV1（完整颗粒）单抗，克隆BEL2b，小鼠来源。可识别AAV1、AAV6、AAV12的完整衣壳（包括空壳和实心颗粒）。

•   DMAB-CS24040：Magic™ 抗AAV2（完整颗粒）单抗，克隆26H5，兔来源。识别AAV2构象表位，不与AAV1、5、6、8、9、DJ、rh.1发生交叉反应。

•   CABT-B9062：抗AAV2（完整颗粒）单抗，克隆B31，小鼠来源。可识别AAV2、AAV2 7m8、AAV3的完整颗粒（空壳/实心）。

•   DPAB2423：抗AAV2 VP1/VP2/VP3多抗，兔来源。识别变性的VP1/VP2/VP3蛋白，覆盖AAV1、2、3、5、6、7、8、9、rh10、DJ、rh74等多种血清型。

AAV抗原（VLP/ELISA对照）

•   DAG-WT823：重组AAV1型病毒样颗粒。

•   DAGC256：AAV2衣壳（用于ELISA对照）。

•   DAGC259：AAV8衣壳（用于ELISA对照）。

AAV抗体ELISA试剂盒

•   DEIASL345：人抗AAV8抗体ELISA试剂盒，用于定性检测。

•   DEIASL348：小鼠抗AAV9抗体ELISA试剂盒，用于定性检测。

•   DEIASL347：人抗AAV2抗体ELISA试剂盒，用于定性检测。

更多产品信息，请联系中国区域代理商：上海起发实验试剂有限公司

（注：本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，具体以品牌信息文档为准。）