美国AssayQuant Technologies特约代理经销商-上海起发

【一、品牌与公司定位】

AssayQuant Technologies 是一家聚焦生物医药研发领域的生物技术企业，由来自麻省理工学院的科研团队发起创立，核心方向集中于蛋白激酶与蛋白磷酸酶的活性检测方案开发。公司围绕自主搭建的 PhosphoSens 技术平台，构建了从荧光传感器肽底物到完整检测试剂盒的产品矩阵，服务于基础科研、药物筛选、先导化合物优化以及作用机制研究等多个环节。

与行业中普遍采用的偶联酶法、放射性法或抗体依赖型检测不同，AssayQuant 的技术路径选择在底物层面做文章——通过在肽段中嵌入专属设计的 Sox 荧光基团，让磷酸化事件本身直接转化为荧光信号的变化。这一思路让检测流程回归"催化行为本身"，减少了二次反应、抗体结合或洗涤步骤带来的噪声与偏差。目前，该平台已覆盖超过 600 个激酶与磷酸酶靶点，配套荧光肽底物库规模超过 50,000 条序列，并被多篇同行评审文献引用。

【二、核心优势】

▲ 底物源自天然序列

传感器肽段基于生理状态下的真实激酶/磷酸酶识别序列优化而来，而非在人工序列上强加赖氨酸、精氨酸或大分子报告基团。这样的设计让酶与底物的相互作用更贴近体内情形，生化实验数据与细胞水平结果之间的相关性更稳健。

▲ 信号机制直接

采用螯合增强荧光（ChEF）原理，Sox 荧光团本身不参与信号放大，只在磷酸化发生后因与镁离子及磷酸根螯合而改变荧光输出。整个过程不需要偶联酶、不需要抗体、不需要洗涤，属于均相"加样-读板"流程。

▲ 两种互补读取格式

连续荧光强度（FI）格式适合机制研究、动力学参数求解；红移时间分辨荧光（TRF）格式以铕离子置换镁离子，将发射波长移至 620 nm 左右，可避开化合物自身荧光干扰，更适合高通量筛选。

▲ 兼容常规设备与多规格板型

检测可在 96 孔、384 孔、1536 孔板上开展，读取端仅需配备常见荧光通道的酶标仪，无需添置专属硬件。

▲ 适配多样品类型

无论纯化重组酶、免疫沉淀激酶、还是粗制细胞/组织裂解物，同一套传感器均可工作，且对 ATP 浓度没有硬性限制，可依据实验设计自行调整。

▲ 数据维度丰富

连续读取模式下可每 30 秒至数分钟采集一次信号，完整呈现反应曲线，支持 IC₅₀、Kᵢ、kᵢₙₐcₜ/Kᵢ、停留时间等动力学参数计算，也能通过跳跃稀释实验区分可逆与不可逆抑制模式。

【三、代表性产品介绍】

▌产品一：连续荧光强度激酶检测试剂盒（PhosphoSens-Kinetic 系列）

● 品名：连续荧光强度激酶检测试剂盒

● 产品特点

 ▷ 基于 PhosphoSens 传感器肽底物，磷酸化后荧光强度随产物累积线性上升

 ▷ 激发约 360 nm，发射约 485 nm，可在常规荧光酶标仪上读取

 ▷ 支持纯化酶与粗裂解物两类样品

 ▷ 反应为均相加样-读板模式，无洗涤、无偶联酶

 ▷ Z' 因子通常优于 0.7，批次间一致性稳定

 ▷ 同一传感器可在连续模式与终点模式间切换（终点模式需补加铕离子）

● 存储条件

 试剂盒各组份收货后按标签指示温度存放，传感器肽底物与酶组份建议避光、-20℃ 保存，避免反复冻融；ATP 与镁离子组分按说明书常温或 4℃ 存放即可。

● 工作原理

 将 Sox 荧光团通过 Fmoc-Cys-Sox（CSx）构建块定点接入肽段磷酸化位点邻近位置。反应体系中加入激酶、ATP 与 Mg²⁺ 后，底物被磷酸化，磷酸根与 Sox 上的螯合位点结合 Mg²⁺，触发螯合增强荧光效应，荧光强度与磷酸化产物量成正比。因信号来自底物本身的化学变化，无需二级检测试剂。

● 使用方法

 ① 按实验设计在酶标板各孔中加入缓冲液、传感器肽底物、待测激酶或裂解物；

 ② 加入含 Mg²⁺ 的 ATP 溶液启动反应，轻微振荡混匀；

 ③ 将酶标板置入读板机，设定激发 360 nm、发射 485 nm，按所需时间间隔连续采集荧光；

 ④ 以时间-荧光曲线拟合反应速率，进一步计算 IC₅₀、Kᵢ 等参数；

 ⑤ 若需转为红移终点读取，在反应结束时补加 Eu³⁺ 溶液，静置数分钟后改用 620 nm 通道采集。

▌产品二：红移时间分辨荧光激酶检测试剂盒（PhosphoSens-Red 系列）

● 品名：红移时间分辨荧光激酶检测试剂盒

● 产品特点

 ▷ 在同一 Sox 传感器基础上，以铕（Eu³⁺）替代 Mg²⁺ 参与终止与信号转换

 ▷ 激发约 360 nm，发射约 620 nm，属时间分辨荧光（TRF）读取

 ▷ 通过延迟采集（通常约 100 μs 延迟）避开化合物自发荧光与背景散射

 ▷ 适合化合物文库初筛、SAR 循环中对背景干扰敏感的项目

 ▷ 可与连续 FI 模式共用同一套传感器，方法迁移成本低

● 存储条件

 传感器肽底物避光、-20℃ 保存；Eu³⁺ 终止液按说明书 4℃ 存放；其余组份参照试剂盒内标签温度指示。

● 工作原理

 前期激酶反应阶段与连续 FI 试剂盒一致，底物磷酸化后 Sox 产生荧光。反应进行到预设时间点后，加入含 Eu³⁺ 的终止/转换液，Eu³⁺ 与磷酸化 Sox 形成红移络合物，此时以时间分辨模式读取 620 nm 处发射信号。因 TRF 本身通过延迟门控剔除短寿命背景荧光，测试化合物自身的荧光基团不再构成干扰。

● 使用方法

 ① 酶标板中各孔加入缓冲液、传感器肽底物、激酶及样品；

 ② 加入 ATP/Mg²⁺ 启动反应，按筛选节奏设定孵育时长；

 ③ 孵育结束时每孔加入 Eu³⁺ 转换液，避光静置使络合完成；

 ④ 酶标仪切换至 TRF 通道，激发 360 nm、发射 620 nm、延迟约 100 μs 采集；

 ⑤ 以终点荧光值归一化后计算抑制率，绘制剂量-响应曲线。

▌产品三：连续荧光强度磷酸酶检测试剂盒（PhosphoSens-Phosphatase 系列）

● 品名：连续荧光强度磷酸酶检测试剂盒

● 产品特点

 ▷ 原理与激酶版本对称——以已磷酸化的 Sox 传感器肽为底物，磷酸酶去磷酸化后荧光衰减

 ▷ 荧光强度随时间下降的速率直接反映磷酸酶催化活性

 ▷ 同样支持纯化磷酸酶与粗裂解物，同样为均相加样-读板

 ▷ 适用于 PTP 家族、SHP 家族、PP 系列等磷酸酶靶点

 ▷ 可配合抑制剂梯度做 IC₅₀ 与选择性评价

● 存储条件

 预磷酸化传感器肽底物避光、-20℃ 保存，避免反复冻融；磷酸酶反应缓冲液与辅因子组份按标签 4℃ 存放。

● 工作原理

 试剂盒提供的传感器肽段在出厂前已完成 Sox 位点磷酸化。加入磷酸酶后，磷酸根被水解脱落，Sox 螯合结构被破坏，荧光强度随之下降。荧光衰减的斜率即为磷酸酶催化速率，全程无需偶联酶或显色/放免检测。

● 使用方法

 ① 酶标板中各孔加入反应缓冲液与预磷酸化传感器肽底物；

 ② 加入待测磷酸酶样品（纯化酶或裂解物）启动反应；

 ③ 酶标仪设定激发 360 nm、发射 485 nm，连续采集荧光衰减曲线；

 ④ 以初始速率拟合酶活性，或通过抑制剂梯度得到 IC₅₀；

 ⑤ 若样品背景荧光较高，可参照激酶红移思路在终点加入 Eu³⁺ 转为 TRF 读取。

【四、在实验中能解决哪些问题】

传统激酶/磷酸酶检测常让科研与筛选人员遇到以下几类困扰，而 PhosphoSens 平台在设计时正是针对这些点做了调整：

▲ 偶联酶法带来的噪声与滞后

许多商用试剂盒依赖偶联酶级联（如 pyruvate kinase/lactate dehydrogenase 耦联 ATP 消耗至 NADH 吸光度），级联每一步都引入变异系数，且对样品中可能存在的代谢物敏感。PhosphoSens 省去偶联环节，信号只来自底物本身。

▲ 抗体依赖型检测的通量与成本压力

HTRF、AlphaScreen 等需磷酸化特异抗体与供/受体对，抗体批次差异、样品中内源 IgG 干扰、以及每孔试剂成本，都是长期筛选中绕不开的问题。PhosphoSens 以化学荧光团取代抗体，均相读取也更适配 1536 孔扩展。

▲ 放射性法的合规与操作负担

³³P-ATP 类方法数据质量高，但涉及同位素采购、废液处理、人员防护，对多数实验室并不友好。荧光法在保持连续动力学能力的同时避开了放射性。

▲ 化合物自身荧光导致假阳性

在化合物文库筛选中，部分分子自带荧光或在 485 nm 附近有吸收，会压低或抬高读数。红移 TRF 格式将发射移至 620 nm 并加延迟门控，可显著压低这类干扰。

▲ 粗裂解物背景高、读数不稳

细胞/组织裂解物中含大量蛋白与代谢物，对偶联酶法与显色法都不友好。PhosphoSens 传感器尺寸小、疏水性低，且在序列层面已针对靶点优化，在裂解物体系中仍可得到可拟合的反应曲线。

▲ 难以区分可逆与不可逆抑制

多数终点法只能给一个 IC₅₀，无法判断抑制剂是否共价结合。连续动力学曲线配合跳跃稀释实验，可从 kinact/Ki 与停留时间两个维度把可逆、不可逆、与时间相关的抑制模式分开。

【五、关于采购与本品牌的常见疑问】

▣ Q1：国内通过什么渠道采购 AssayQuant 产品？

 A：美国 AssayQuant Technologies 的产品在国内由上海起发实验试剂有限公司作为特约代理经销商提供服务，包括货期确认、目录选型、定制底物咨询与售后技术对接。

▣ Q2：试剂盒到货后保质期与存储有什么要注意的？

 A：传感器肽底物类组份对光与冻融较敏感，建议收货后立即按标签温度避光存放，-20℃ 条件下避免多次冻融；ATP、缓冲液等组份按说明书指定温度即可。具体某款产品的开封后稳定期以说明书为准。

▣ Q3：现有酶标仪能不能直接用？

 A：只要设备具备荧光强度通道（360 nm 激发 / 485 nm 发射），连续 FI 格式即可直接跑；红移 TRF 格式需要设备支持时间分辨荧光读取（360 nm 激发 / 620 nm 发射，带延迟门控）。目前主流多模式酶标仪大多覆盖这两组参数。

▣ Q4：粗裂解物里内源激酶/磷酸酶会不会干扰？

 A：PhosphoSens 传感器本身是按单一靶点序列优化的，对目标酶有选择性，但仍建议先做空白裂解物对照，确认背景斜率在可接受范围。若背景偏高，可调整裂解物投入量或缩短孵育窗口。

▣ Q5：ATP 浓度能不能自己改？

 A：可以。PhosphoSens 不绑定特定 ATP 浓度，Kᵢ 与 Km 类参数求解时反而需要设多个 ATP 梯度。注意 Mg²⁺ 需与 ATP 等摩尔或略过量，以保证 Sox 螯合效率。

▣ Q6：如果想测的靶点在目录里没有怎么办？

 A：AssayQuant 提供定制传感器设计服务，依托超过 50,000 条 CSx 肽库的筛选经验，可为冷门激酶或磷酸酶、或其突变体位点开发对应传感器。国内需求可通过上海起发实验试剂有限公司对接技术团队评估周期与报价。

▣ Q7：一套试剂盒大概能做多少孔？

 A：以 384 孔板、每孔 20–30 μL 反应体积估算，10 nmol 规格的传感器肽通常可支撑数十板至上百板规模，具体取决于单孔肽浓度设定。目录试剂盒的规格说明中会给出推荐工作浓度区间。

【特约经销】

上海起发实验试剂有限公司为美国AssayQuant Technologies特约代理经销商，负责其在国内的产品供应与技术对接。如需索取目录、询价或咨询定制底物开发，可通过上海起发实验试剂有限公司常规联络方式接洽。

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更多产品信息，请联系中国区域代理商：上海起发实验试剂有限公司

（注：本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，具体以品牌信息文档为准。）

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