NanoTag Biotechnologies从GFP检测到泛素链富集与特约代理经销商一览

▍前言

NanoTag Biotechnologies旗下纳米抗体与亲和试剂现已由上海起发实验试剂有限公司作为特约代理经销商引入国内科研市场，面向细胞生物学、分子生物学与蛋白研究场景提供工具支持。

一、公司介绍

NanoTag Biotechnologies 聚焦于单域抗体（sdAb / VHH）技术的科研转化，围绕蛋白识别、标签检测、靶向富集与信号放大等环节，构建亲和试剂产品体系。

其技术路径以羊驼来源单域抗体为基础，通过大肠杆菌或细胞表达系统生产，再将单域抗体与荧光染料、生物素、酶、琼脂糖 beads 等模块组合，形成不同功能的实验工具。相比传统完整抗体，单域抗体分子量较小，通常只识别天然折叠状态下的抗原表位，在免疫荧光、免疫沉淀、蛋白富集等场景中具备较好的兼容性与特异性。

品牌主要产品方向包括：

1. FluoTag 系列：一步法荧光标记单域抗体，用于 GFP、RFP 等荧光蛋白的直接识别；

2. Selector 系列：将单域抗体固定在琼脂糖或磁珠基质上，用于标签蛋白、泛素链等靶标的富集；

3. Smart Secondaries 系列：纳米二抗工具，用于替代部分传统二抗场景；

4. ALFA-tag 系统：面向标签蛋白检测、定位与效应复合物组装的模块化试剂；

5. 定制与开发服务：围绕特定抗原开发单域抗体及偶联形式。

NanoTag 的产品不强调复杂设备依赖，侧重在常规免疫学、细胞与蛋白实验中提供操作路径更直接的试剂。

二、热门产品介绍

01｜GFP Selector（GFP选择器）

1. 基础信息  

   • 品名：GFP Selector  

   • 货号：N0310  

   • 克隆：1H1  

   • 宿主：羊驼  

   • 表达系统：大肠杆菌  

   • 主要应用：免疫沉淀 IP、Co-IP  

   • 结合容量：每微升填充 beads 可结合大于 3 μg GFP 融合蛋白

2. 产品特点  

   • 识别 GFP 及多种常见衍生物，包括 EGFP、mEGFP、Cerulean、eCFP、mTurquoise、acGFP、Emerald、superfolder GFP、eYFP、mVenus、Citrine 等；

   • 单域抗体通过共价键定向固定在 4% 交联琼脂糖珠上，减少传统 IgG 偶联 beads 可能出现的轻链、重链泄漏；

   • 对非特异性背景有较好抑制表现；

   • 可兼容多种缓冲体系，便于根据样本类型调整结合与洗涤条件。

3. 存储条件  

   • 配方：含 20% 乙醇的 PBS 中 50% 悬浮液；

   • 运输：常温运输；

   • 保存：4℃保存，有效期最长 12 个月；

   • 注意：不可冷冻。

4. 工作原理  

   GFP Selector 将高亲和力抗 GFP 单域抗体定向固定在琼脂糖基质上。当样本中存在 GFP 或其衍生物融合蛋白时，单域抗体可特异性捕获目标蛋白。由于单域抗体以共价方式固定，且识别空间结构完整的 GFP 表位，因此在洗脱样本中较少出现抗体片段污染。

5. 使用方法  

   • 平衡 beads：取适量 50% 悬浮液，用结合缓冲液洗涤并平衡；

   • 加样：将含有 GFP 融合蛋白的裂解液与 beads 混合；

   • 结合：4℃旋转孵育，时间根据样本浓度优化；

   • 洗涤：使用兼容缓冲液去除非特异性结合蛋白；

   • 洗脱：根据下游检测需求选择变性或非变性洗脱方式；

   • 检测：洗脱产物可用于 Western blot、质谱或活性分析。

02｜K63 Ubiquitin Selector（K63泛素选择器）

1. 基础信息  

   • 品名：K63 Ubiquitin Selector  

   • 货号：N1910  

   • 克隆：D1-1  

   • 宿主：合成文库来源  

   • 表达系统：大肠杆菌  

   • 主要应用：免疫沉淀 IP  

   • 结合容量：每微升填充 beads 可富集约 2.5 μg K63 连接泛素

2. 产品特点  

   • 特异性识别 K63 连接的多泛素链；

   • 对 K63 连接修饰相关的信号转导、DNA 修复、内吞过程研究有较好适用性；

   • 单域抗体共价固定于 4% 交联琼脂糖 beads；

   • 可减少对其他泛素连接方式的交叉捕获，适合做连接方式选择性富集。

3. 存储条件  

   • 配方：含 20% 乙醇的 PBS 中 50% 悬浮液；

   • 运输：常温运输；

   • 保存：4℃保存，最长 12 个月；

   • 注意：不可冷冻。

4. 工作原理  

   泛素可以通过不同赖氨酸位点形成多聚链，其中 K63 连接泛素链常与信号通路调控、损伤应答等过程相关。K63 Ubiquitin Selector 利用识别 K63 连接表位的单域抗体，将对应泛素化蛋白从复杂样本中富集出来，从而帮助研究者分析 K63 连接修饰的底物与动态变化。

5. 使用方法  

   • 取适量 beads，用 IP 缓冲液洗涤平衡；

   • 将细胞或组织裂解液与 beads 混合；

   • 4℃旋转孵育，使 K63 连接泛素化蛋白充分结合；

   • 洗涤去除非特异蛋白；

   • 使用合适洗脱条件收集样本；

   • 下游可进行 WB、质谱或酶学分析。

03｜FluoTag-X4 anti-GFP AbberiorStar460

1. 基础信息  

   • 品名：FluoTag-X4 anti-GFP AbberiorStar460  

   • 货号：N0304-Ab460-L  

   • 克隆：1H1、1B2 混合  

   • 宿主：羊驼  

   • 表达系统：大肠杆菌  

   • 主要应用：免疫荧光 IF、免疫细胞化学 ICC  

   • 推荐稀释：1:250，对应单克隆终浓度约 5 nM

2. 产品特点  

   • 由两种单域抗体混合组成，分别识别 GFP 上不同表位；

   • 每个单域抗体携带两个荧光团，目标蛋白可附带四个荧光信号；

   • 信号亮度较单一荧光标记更有优势；

   • 识别 GFP 及 EGFP、mEGFP、eCFP、mTurquoise、superfolder GFP、eYFP、mVenus、Citrine 等衍生物；

   • 适合天然构象蛋白的直接荧光标记。

3. 存储条件  

   • 配方：含 2% BSA 的 PBS，pH 7.4，冻干形式；

   • 运输：常温运输；

   • 冻干状态：2–8℃可保存最长 12 个月；

   • 复溶后：-80℃可保存最长 6 个月；

   • 工作分装：-20℃可保存约 4 周；

   • 注意：复溶建议分装，避免反复冻融。

4. 工作原理  

   FluoTag-X4 不是传统荧光二抗，而是将荧光团直接连接在抗 GFP 单域抗体上。两种 sdAb 同时结合 GFP 靶标，每个 sdAb 再携带两个荧光染料，使单个目标蛋白获得多重信号增益。由于单域抗体主要识别天然折叠蛋白，因此更适合细胞成像，不建议用于 Western blot 中变性蛋白检测。

5. 使用方法  

   • 复溶：按说明书使用适宜体积去离子水或含甘油缓冲液复溶；

   • 分装：立即分成小份，-80℃长期保存；

   • 染色：固定或透化后的样本按 1:250 稀释使用；

   • 孵育：湿盒中避光孵育，时间依样本类型优化；

   • 洗涤：用缓冲液充分洗去未结合试剂；

   • 观察：直接进行荧光显微镜或超高分辨成像。

三、品牌业务可解决的实验问题

1. 标签蛋白富集困难  

   传统抗 GFP 抗体偶联 beads 可能存在轻重链泄漏、背景偏高的问题。GFP Selector 通过共价固定单域抗体，提升富集纯度。

2. 泛素连接方式区分复杂  

   K63、K48 等不同连接类型对应不同生物学过程。K63 Selector 可提供连接方式选择性，帮助研究者聚焦特定泛素信号。

3. 荧光成像标记步骤繁琐  

   FluoTag 系列可直接识别标签蛋白，省去“一抗＋荧光二抗"两步流程，缩短实验时间，也减少二抗交叉反应风险。

4. 传统二抗带来非特异性背景  

   Smart Secondaries 类纳米二抗分子量小、物种交叉反应可控，适合多重染色、精细定位与高分辨成像。

5. 蛋白检测体系模块化不足  

   ALFA-tag 系统可通过抗 ALFA 单域抗体、双特异性试剂组合，搭建检测、定位、富集与效应分子组装平台。

6. 小分子量靶标识别受限  

   单域抗体对缝隙表位、保守构象表位有较好访问能力，可应用于部分常规抗体难以识别的靶标。

四、采购与使用常见疑问

Q1：NanoTag 试剂是否适合 Western blot？  

A：需按具体货号判断。FluoTag 类试剂主要识别天然折叠蛋白，通常不推荐用于 WB；部分 ALFA、Smart Secondaries 产品可支持 WB，以说明书应用范围为准。

Q2：GFP Selector 能识别所有 GFP 变种吗？  

A：可识别多数常见绿色荧光蛋白及其衍生物，但未测试变种不能保证结合效率，建议先做小规模预实验。

Q3：K63 Selector 会不会识别单体泛素？  

A：产品主要识别 K63 连接多泛素链，对单体泛素或不同连接类型的识别能力以说明书特异性描述为准。

Q4：FluoTag 复溶后如何避免失活？  

A：建议立即分装，减少冻融次数，避光保存，并避免长期放置于 4℃工作区。

Q5：琼脂糖 beads 类产品可以冷冻保存吗？  

A：不可以。N0310、N1910 均要求 4℃保存，冷冻可能破坏 beads 结构与结合性能。

Q6：产品是否可用于临床诊断？  

A：不能。所有产品仅限体外研究与科研使用，不用于诊断、治疗或人体应用。

Q7：不同 FluoTag 货号能否混用？  

A：可根据荧光通道与靶标选择组合，但需注意光谱重叠、稀释比例与样本兼容性。

Q8：如何判断选购琼脂糖 beads 还是磁珠？  

A：样本量大、常规离心操作可选琼脂糖 beads；样本少、希望自动化或快速分离，可关注磁珠类规格。

Q9：试剂到货后需要离心吗？  

A：冻干粉一般按说明书复溶；beads 悬浮液使用前可轻弹混匀，避免剧烈离心破坏基质。

Q10：如果实验无信号，优先排查哪些环节？  

A：确认靶标是否为天然构象、样本固定透化是否适度、稀释比例是否合适、荧光通道是否匹配，以及试剂是否按要求避光保存。

关键词：单域抗体、纳米抗体、GFP免疫沉淀、K63泛素富集、FluoTag荧光标记、蛋白标签检测、ALFA标签系统、纳米二抗、琼脂糖亲和 beads、免疫荧光试剂、Co-IP工具、泛素链分型、GFP融合蛋白纯化、科研抗体替代方案、细胞成像标记、蛋白互作研究、泛素化机制研究、荧光蛋白识别、低背景免疫沉淀、标签蛋白富集

更多产品信息，请联系中国区域代理商：上海起发实验试剂有限公司

（注：本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，具体以品牌信息文档为准。）

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