iNtRON Biotechnology分子生物学试剂，核酸提取与PCR检测选型指南

iNtRON Biotechnology（简称 iNtRON）的分子生物学试剂覆盖核酸提取、PCR 预混液、支原体检测与蛋白研究等环节。本文围绕 RNA 提取中基因组 DNA 残留、PCR 扩增重复性不足、细胞培养支原体污染确认这三类常见实验问题，结合具体货号说明选型思路与操作要点。

 一、公司与业务介绍

iNtRON Biotechnology 的业务分为试剂与诊断、生物新药两个方向，面向科研实验室与体外诊断市场提供分子生物学试剂、分子诊断试剂盒及生物酶制剂。试剂业务以 DR 事业部为主体，产品从样本前处理延伸到核酸扩增与信号检测。噬菌体内溶素等技术平台则为耐药菌相关研究提供工具与候选方案。

目前，iNtRON 分子生物学试剂的产品线由五个板块构成：核酸提取与纯化、PCR 与 qPCR、逆转录与克隆、蛋白研究，以及支原体检测与清除。核酸提取板块包含 G-spin、DNA-spin、easy-spin、RNA-spin 与 Viral Gene-spin 等系列，分别对应基因组 DNA、质粒、总 RNA 与病毒核酸的制备。

分子生物学试剂的扩增板块以 i-Taq、i-StarTaq、i-MAX II 等聚合酶为核心，配套 Maxime 预混液系列与 RealMOD 实时荧光定量体系。蛋白研究板块提供 PRO-PREP 提取液、SMART BCA 定量试剂与 Western 检测试剂，支原体板块则由 e-Myco 检测与 MycoClean 清除两类产品组成。

生产体系依 ISO 9001、ISO 13485 与 GMP 标准运行，原料筛选、配制、分装与成品放行各环节均设有质控节点。干燥型预混液采用真空干燥工艺，批次间差异按同一放行标准控制，便于跨批次实验的数据对照。部分诊断类产品按体外诊断用途开发，科研用试剂则统一标注研究用途。

在中国市场，iNtRON Biotechnology 通过授权代理商上海起发实验试剂有限公司开展产品销售与技术服务。代理商承担常规备货、订单执行与基础技术答疑，货号查询、规格确认与批量采购可以在同一渠道完成。涉及批次文件、质检报告与定制需求时，也可由代理商向品牌方转接。

分子生物学试剂的产品目录、说明书与安全数据表随批次提供，操作参数以现行版说明书为准。同一货号在不同包装规格下的反应体积与保存条件可能存在差异，取用前应先核对标签信息。

 二、热门产品介绍

 1. 25025｜Maxime™ PCR PreMix Kit（i-Taq）

◆ 品名与货号

Maxime™ PCR PreMix Kit（i-Taq）为干燥型 PCR 预混液，货号 25025，规格 96 管，单管对应 20 μl 反应体系。同系列的 480 管装对应货号 25026，两者反应组分一致，仅包装容量不同。

◆ 产品特点

作为 iNtRON 分子生物学试剂中的常规扩增产品，每管在出厂前完成 i-Taq DNA 聚合酶、dNTP、反应缓冲液与上样缓冲液的分装与干燥，实验时无需逐项配制。加样步骤减少后，孔间差异与气溶胶污染的风险同步下降，适合成批样本的常规扩增。管内已含上样缓冲液，扩增结束后可直接点样电泳。

◆ 存储条件

-20℃ 避光保存，干燥状态下可常温短期运输。复溶或加样后的反应管不宜再次冻融，未用完的预混管应密封后回存。长期保存应置于恒定低温环境，避免温度频繁波动。

◆ 工作原理

预混体系中的 i-Taq 聚合酶以 DNA 为模板，在引物引导下沿 5' 到 3' 方向延伸，dNTP 提供底物，缓冲液维持 pH 与离子强度。干燥基质遇水复溶后恢复反应活性，热循环完成模板变性、引物退火与链延伸三个阶段。

◆ 使用方法

每管加入模板 DNA 1 μl、上下游引物各 1 μl，补无核酸酶水至 20 μl，短暂离心后置入热循环仪。退火温度按引物 Tm 值设定，延伸时间按目标产物长度调整。循环结束后可直接取 5 μl 产物上样，无需另加上样缓冲液。

◆ 适用检测场景

基因分型、阳性克隆筛选、菌落 PCR、转基因鉴定与病原核酸初筛均可使用。目标产物在 3 kb 以内时扩增表现较稳定，长片段或高 GC 模板建议改用带校正活性的预混液。需要更高特异性的场合，可选择热启动版本的预混体系。

 2. 17221｜easy-spin™ Total RNA Extraction Kit

◆ 品名与货号

easy-spin™ Total RNA Extraction Kit 为总 RNA 提取试剂盒，货号 17221，规格 50 次，配套 50 支结合柱与收集管。试剂盒同时适用于培养细胞与组织样本，细胞与组织的操作流程在裂解之后合并。

◆ 产品特点

该试剂盒把溶液型裂解与柱式纯化结合，裂解后经氯仿分相，再由硅胶膜吸附 RNA。流程不设酒精沉淀，细胞样本约 30 分钟可完成，提取产物中基因组 DNA 残留较低，可直接进入逆转录反应。与纯溶液型产品相比，省去了沉淀与重溶步骤，样本量较少时回收更集中。

◆ 存储条件

裂解液（easy-BLUE）到货后 4℃ 保存，其余组分室温存放，说明书标示稳定期为 2 年。洗涤液 B 为浓缩液，使用前须按标签加入规定体积的无水乙醇。配制后的洗涤液应在标签注明日期，避免乙醇挥发导致盐浓度变化。

◆ 工作原理

裂解液中的变性剂使蛋白构象改变并抑制 RNase 活性，氯仿使水相与有机相分离，RNA 留在上层水相。高盐结合条件下 RNA 吸附于硅胶膜，洗涤步骤去除残留盐分与蛋白，低盐缓冲液将 RNA 从膜上洗脱。分相界面处的蛋白与基因组 DNA 不被水相带走，是残留控制的关键环节。

◆ 使用方法

取 1–10×10⁶ 细胞，离心去培养基后加 1 ml 裂解液，室温涡旋 10 秒至无可见团块。加 200 μl 氯仿混匀，13,000 rpm、4℃ 离心 10 分钟，取 400 μl 上层水相，加等体积结合液后过柱。经洗涤液 A、B 各 700 μl 洗涤并离心干燥，随后用 50 μl 洗脱液回收。组织样本按每 50–100 mg 加 1 ml 裂解液匀浆，匀浆液体积不超过裂解液体积的十分之一。

◆ 适用检测场景

RT-PCR、实时荧光定量 PCR、Northern 杂交与转录组测序的样本制备均可使用。细胞上样量不宜超过说明书上限，过量上样会使膜容量饱和并带出基因组 DNA。提取产物建议分装保存，避免多次冻融造成降解。

 3. 25239｜e-Myco™ VALiD Mycoplasma PCR Detection Kit

◆ 品名与货号

e-Myco™ VALiD Mycoplasma PCR Detection Kit 为支原体检测试剂盒，货号 25239，规格 48 测试。包装内含预混反应管、阳性对照 DNA 与无核酸酶水，阳性对照为含支原体 16S 序列片段的重组 DNA。

◆ 产品特点

每管预混含热启动 Taq 聚合酶、dNTP、支原体引物与内参，另配阳性对照与无模板对照。检测在 3 小时内完成，检出下限为 10 CFU/ml，可覆盖多种常见支原体。管内加入 8-MOP，用于降低扩增产物残留带来的假阳性；内参与样本在同一管中扩增，便于判断反应是否有效。

◆ 存储条件

-20℃ 以下保存，说明书标示有效期 18 个月，具体批号的有效期以包装标签为准。预混管应避免反复冻融与长时间室温放置，取用后尽快回存。阳性对照为独立包装，开封后应与其他组分分开保存，防止交叉污染。

◆ 工作原理

引物针对支原体 16S rRNA 基因的保守区设计，目的扩增产物约 270 bp。内参在同一反应体系中竞争性扩增，产物约 180 bp，用于确认聚合酶与循环条件正常。8-MOP 在紫外激活后与 DNA 结合，抑制残留模板的再次扩增。

◆ 使用方法

取细胞培养上清制备模板，按说明书完成热处理或核酸提取，取规定体积加入预混管，补无核酸酶水至反应体积。扩增结束后以 1.5%–2% 琼脂糖凝胶电泳，100 V 条件下分离约 40 分钟。每次检测应同时设置阳性对照与无模板对照，三者结果一并判读。

◆ 适用检测场景

细胞库检定、细胞株日常污染排查、生物制品生产过程的支原体监控均可使用。需要定量结果或闭管检测时，可改用同系列的实时荧光定量试剂盒。常规贴壁细胞与悬浮细胞培养上清均可作为检测样本。

 三、实验问题与对应解决

 1. RNA 提取后 PCR 出现基因组 DNA 条带怎么办？

柱式提取若上样量超过膜容量，基因组 DNA 会随 RNA 一同洗脱，扩增时表现为高分子量条带。改用 17221 时，细胞数与裂解液用量按说明书配比，氯仿分相后只取上层水相，可减少 DNA 共沉淀。产物不经 DNase 处理直接逆转录，凝胶上通常不再出现明显的基因组条带。

 2. PCR 扩增条带偏弱、批间重复性差是什么原因？

反复冻融、分装次数过多与手动配制的体积误差，会让酶活与 dNTP 浓度逐次偏移。25025 将反应组分预分装于单管，复溶后各孔体系一致，减少配制环节引入的偏差。按同一退火温度与循环数运行，条带亮度在批内通常更接近，弱带样本可先调整模板加入量。

 3. 细胞培养出现支原体污染，怎样快速确认？

支原体污染不引起培养基明显浑浊，传统培养法需要数周，污染早期容易被常规镜检漏过。25239 直接扩增培养上清中的 16S rRNA 基因，3 小时可完成判读，培养上清中的低浓度污染也能被检出。阳性样本在凝胶上同时出现目的带与内参带，便于与背景条带区分。

 4. 支原体检测内参条带消失，这次结果还能用吗？

模板浓度过高时，强扩增信号会压制内参的竞争性扩增，内参带随之减弱或消失。将模板稀释后重复检测，内参带通常恢复，此时结果才具备判读意义。若稀释后内参仍不出现，应按说明书排查抑制物残留与加样环节。

 5. RNA 得率偏低、A260/280 比值不理想如何排查？

样本量不足、裂解不够或洗涤后乙醇残留，都会影响得率与纯度比值。17221 的操作中，裂解后须涡旋至无可见团块，柱膜在洗脱前充分离心干燥。按 50 μl 体积洗脱，洗脱液在膜上停留 1 分钟再离心，回收量通常更稳定。

 四、常见疑问与解答

 1. 货号 25025 与 25026 有什么区别？

两者反应体系相同，25025 为 96 管装，25026 为 480 管装，后者适合用量较大的实验室。选购时按单次实验规模与冷柜空间确定规格，避免大包装长期存放造成反复取用。

 2. 到货后试剂应如何储存？

预混液与检测试剂盒按标签要求置于 -20℃ 以下，easy-spin 的裂解液需 4℃ 保存，其余组分室温存放。运输过程中的短时温度波动通常不影响后续使用，到货后应尽快按标签归位。

 3. 预混液复溶或开瓶后能放多久？

复溶后的反应管建议当次用完，不宜反复冻融。未开封的干燥预混管在 -20℃ 条件下按标签有效期保存，取用时应缩短开盖时间并保持管内干燥。

 4. easy-spin 提取的总 RNA 还需要 DNase 处理吗？

说明书的设计目标是降低基因组 DNA 残留，常规 RT-PCR 与 qPCR 可直接使用。对残留要求更严格的实验，可另做 DNase 处理，并设置不加逆转录酶的对照以判断残留来源。

 5. 20 μl 体系下模板与引物加多少？

通常模板 1 μl、上下游引物各 1 μl，其余体积用无核酸酶水补足。模板浓度因样本而异，复杂样本可先做梯度稀释，确定不产生抑制的加入量。

 6. e-Myco VALiD 的结果如何判读？

目的带（约 270 bp）与内参带（约 180 bp）同时出现判为阳性；仅内参带出现判为阴性；两带均不出现说明反应无效，应重做。判读以说明书给出的条带位置与凝胶条件为准。

 7. 25239 与实时荧光定量版本如何选择？

25239 为终点 PCR 加电泳判读，适合常规污染排查与样本量较小的场合。需要定量、闭管检测或样本量较大时，可选用同系列的实时荧光定量试剂盒。

 8. 如何核对货号与规格是否一致？

以外包装标签上的货号、规格与批号为准，并与说明书目录页核对。同一货号存在多种包装规格时，标签标注的容量应与订购信息一致。

 9. 授权代理商能提供哪些支持？

上海起发实验试剂有限公司负责中国区域的授权销售，可协助分子生物学试剂的货号查询、规格确认、批量备货与常规技术答疑。产品目录、说明书与批次相关文件也可通过该渠道获取。

 10. 收到试剂后发现异常如何处理？

先核对包装完整性、冷链状态与标签信息，保留原包装与批号记录。确认存在质量问题时，按代理商的售后流程提交批次信息与实验记录，由供货方核查后给出处理意见。

更多产品信息，请联系中国区域代理商：上海起发实验试剂有限公司

（注：本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，具体以品牌信息文档为准。）