Bio SB免疫组化检测系统热门产品与实验问题解析

Bio SB（简称 BSB）是一家聚焦分子病理与组织化学检测的试剂及仪器供应商，业务以免疫组化检测系统为核心，覆盖抗体、辅助试剂与自动染色平台。本文围绕免疫组化实验中常见的背景偏深、DAB 显色深浅不一、p16 与 Ki-67 双标占用切片等问题，结合 BSB 0201、BSB-0354-7、BSB-3767-3 三款在售产品的说明书参数，说明产品选型与操作要点。

一、公司与业务介绍

1、业务范围与检测场景

Bio SB 的业务集中在免疫组织化学、免疫细胞化学、免疫荧光、显色原位杂交与荧光原位杂交五类组织化学检测。样本类型覆盖福尔马林固定石蜡包埋组织、冰冻切片、细胞涂片与细胞制备。产品形态既有单一抗体与显色液，也有按测试数配套的完整试剂盒。

2、产品线构成

目前，产品线由检测系统、抗体、辅助试剂与染色设备四部分构成，染色设备包括 TintoStainer Plus 自动染色平台与 TintoRetriever 修复设备。免疫组化检测系统包括生物素-链霉亲和素型 ImmunoDetector、一步法 PolyDetector、两步法 PolyDetector Plus 以及多重染色 MultiDetector。抗体部分包含 400 余种兔源与小鼠单克隆抗体，并配套组织对照切片与组织芯片。辅助试剂覆盖抗原修复液、过氧化物酶阻断剂、DAB 与 AEC 底物色原、复染液与封片剂。

3、质量管理体系

生产与放行按 cGMP、ISO 13485:2016 与 CE IVD 的现行要求执行。说明书对储存温度、有效期、对照设置与结果判读限制作出明确标注。批次性能由阳性与阴性对照确认，使用者可在同一切片上同时观察靶标信号与背景着色。

4、与授权代理商的合作

在中国市场，Bio SB 的授权代理商为上海起发实验试剂有限公司，负责产品销售与技术支持。订购以货号与规格作为识别依据，运输与储存条件按品牌方说明书执行。使用中的技术问题可经代理商反馈至品牌方，形成操作记录与排查依据。

二、热门产品介绍

1、BSB 0201｜Mouse/Rabbit PolyDetector DAB HRP Brown 检测系统

①、品名与货号

品名为 Mouse/Rabbit PolyDetector DAB HRP Brown 检测系统，常规货号 BSB 0201，规格 15 mL。同系列提供 BSB 0201S（5 mL）、BSB 0203（50 mL）、BSB 0205（100 mL）以及仅含标记物的 BSB 0201H。

②、产品特点

该免疫组化检测系统为一步法非生物素聚合物体系，将 Fab' 免疫球蛋白片段与辣根过氧化物酶直接偶联在生物聚合物骨架上。体系可识别小鼠 IgG、小鼠 IgM 与兔源单克隆或多克隆抗体，即用型配方无需自行稀释。

③、存储条件

未开封试剂储存于 2-8℃，稳定期至标签标示的有效期。使用中避免温度反复波动，也不宜长时间置于室温环境。

④、工作原理

聚合物上的辣根过氧化物酶催化 DAB 氧化，生成不溶于醇与有机溶剂的棕色沉淀。沉淀沉积在抗原所在位置，形成可在光学显微镜下判读的棕色信号。

⑤、使用方法

石蜡切片厚度 3-5 μm，58℃ 烤片 2 小时，随后脱蜡至水，并按柠檬酸或 EDTA 方案完成热修复。修复可选用压力锅 15 分钟、95-99℃ 水浴 30-60 分钟或蒸汽 30-60 分钟，结束后室温静置 15-20 分钟。染色按过氧化物酶阻断 5 分钟、一抗室温 45-60 分钟、HRP 标记物 45 分钟、DAB 显色 5-10 分钟的次序进行，DAB 工作液以 1 滴色原对 1 mL 缓冲液现配。显色后经复染、脱水与封片即可镜检。

⑥、适用检测场景

该免疫组化检测系统适用于石蜡组织、冰冻切片、血涂片、细胞涂片与细胞制备。核、胞质与膜定位的抗原均可使用，研究用途场景下常与 Ki-67、细胞角蛋白等抗体搭配。

2、BSB-0354-7｜HPV MultiDetector（p16 与 Ki-67）双标检测试剂盒

①、品名与货号

品名为 HPV MultiDetector（p16 与 Ki-67）HRP/AP 双标检测试剂盒，货号 BSB-0354-7，规格 7 mL，按说明书约可完成 70 个测试。同系列另有 BSB-0354-15 与 BSB-0354-50。

②、产品特点

试剂盒把兔源 Ki-67 单克隆抗体（克隆 RM360）与小鼠源 p16 单克隆抗体（克隆 16P04、JC2）配成即用型鸡尾酒。检测端采用 HRP 与 AP 两种酶标聚合物，可在同一切片上给出两种颜色。包装内含修复液、洗液、两种阻断剂、两种显色液、复染保护液与 5 张对照切片。

③、存储条件

整盒试剂储存于 2-8℃，有效期以标签为准。20× 修复液与 20× 洗液在使用前用蒸馏水稀释为 1×，稀释后的工作液不宜长期存放。

④、工作原理

Ki-67 抗体结合核内增殖蛋白，p16 抗体结合核与胞质的 p16 蛋白。两种聚合物分别携带 HRP 与 AP，DAB 在 HRP 位点生成棕色沉淀，ALK Scarlet 在 AP 位点生成红色沉淀。

⑤、使用方法

流程为过氧化物酶阻断 5 分钟、AP 阻断 5 分钟、抗体鸡尾酒 20 分钟、酶标聚合物 15 分钟、DAB 显色 10 分钟、ALK Scarlet 显色 10 分钟、苏木素复染 30 秒、Fast ChromoProtector 处理 30 秒。两种显色工作液均按 1 滴色原对 1 mL 缓冲液配制，其中 ALK Scarlet 工作液需在 5 分钟内使用。

⑥、适用检测场景

适用于宫颈活检、宫颈液基细胞学与口咽部鳞状细胞癌等需要观察 p16 与 Ki-67 共定位的样本。双标结果用于研究场景下判断同一细胞区域内两种信号的分布关系。

3、BSB-3767-3｜Ki-67（RM360）兔单克隆抗体

①、品名与货号

品名为 Ki-67（RM360）兔单克隆抗体，即用型货号 BSB-3767-3，规格 3.0 mL。浓缩型对应 BSB-3767-01、BSB-3767-05 与 BSB-3767-1，说明书建议稀释比 1:100-1:500。

②、产品特点

该免疫组化抗体克隆为 RM360，同型为 IgG，识别人源 Ki-67，定位在细胞核。即用型配方开瓶后可直接滴加，浓缩型需按切片与检测系统自行滴定。配套对照切片货号为 BSB-9251-CS，每套 5 张。

③、存储条件

抗体储存于 2-8℃，含低于 0.1% 的叠氮钠作为防腐剂。对照切片储存于 20-25℃，不与抗体同放。

④、工作原理

免疫原为对应人 Ki-67 蛋白内部区域的肽段。Ki-67 在 G1、S、G2 与有丝分裂期表达，静止期 G0 不表达，因此核内棕色信号的有无与比例可反映细胞群增殖状态。

⑤、使用方法

石蜡切片经脱蜡、热修复与阻断后滴加一抗，室温孵育 30-60 分钟。随后按所选检测系统的步骤完成标记物孵育与 DAB 显色，本款抗体可与 BSB 0201 一步法体系配套使用。

⑥、适用检测场景

适用于乳腺、宫颈、结肠与胃肠道、肺、淋巴瘤、黑色素瘤与皮肤、卵巢等肿瘤组织的增殖指数观察。判读以核染色为准，计数区域与阳性阈值需在科室内预先约定。

三、实验问题与对应解决

1、免疫组化背景偏深，问题出在内源性酶还是非特异结合？

背景偏深常见于三个环节：内源性过氧化物酶未被充分阻断、聚合物与组织成分发生非特异吸附、步骤间洗涤不充分。BSB 0201 这套免疫组化检测系统的过氧化物酶阻断步骤为 5 分钟，配合 Fab' 片段设计的聚合物可减少 Fc 段带来的非特异结合。按说明书在每步之间用洗液充分漂洗后，可观察到的改善是背景着色减轻、核与胞质信号边界更清楚。

2、DAB 显色忽深忽浅，怎样把色阶固定下来？

色阶波动多来自色原与缓冲液的比例、显色时长以及工作液放置时间。BSB 0201 这套免疫组化检测系统配套的 DAB 需按 1 滴色原对 1 mL 缓冲液配制，并在使用前临时配制。把显色时间固定在 5-10 分钟区间后，同批切片的棕色深浅趋于一致。

3、p16 与 Ki-67 分开染，切片不够用怎么办？

连续切片分别染色会带来对位误差，病灶内异质性也会让两张切片的结果难以对应。BSB-0354-7 将两种抗体配成鸡尾酒，在同一切片、同一孵育步骤中完成结合。双色显影后可在同一视野内比较 p16 胞质与核信号、Ki-67 核信号的分布，减少连续切片带来的对位误差。

4、宫颈液基细胞学样本量少，双标染色如何控制试剂消耗？

液基细胞学制片面积小、细胞数量有限，按大片滴加会浪费试剂。BSB-0354-7 的 7 mL 规格按 0.1 mL 每测试设计，约合 70 个测试，实际滴加量可按盖片面积调整。小批量染色时按需取液，可观察到的改善是整盒试剂的余量更易控制。

5、Ki-67 阳性指数判读，为什么不同人给出的数值差很多？

差异主要来自热点区选择、计数细胞总数与阳性强度阈值的不同。BSB-3767-3 为核定位抗体，即用型浓度稳定，配合一步法体系可获得较均匀的核染色。在约定热点区与计数规则的前提下，同一病例的重复计数结果趋于接近。

四、常见疑问与解答

1、Bio SB 的货号如何查询和确认？

货号由 BSB 前缀、数字主体与规格后缀组成，例如 BSB 0201 为 15 mL 装，BSB 0201S 为 5 mL 装。抗体类货号常以末段数字表示规格，如 BSB-3767-3 为 3.0 mL 即用型。下单前应以产品标签、说明书与代理商报价单三处信息互相核对。

2、检测系统与抗体需要冷冻保存吗？

不需要。PolyDetector 免疫组化检测系统、HPV 双标试剂盒与 Ki-67 抗体均标注 2-8℃ 储存，冻结与反复升温会影响聚合物与酶活性。对照切片按 20-25℃ 存放，不与试剂混放。

3、试剂开瓶后可以稳定使用多久？

稳定性以标签有效期为准，开瓶不改变这一期限。取液时避免吸头接触组织或反复开盖，可减少微生物污染与交叉污染。DAB 工作液、稀释后的修复液与洗液不属于长期保存对象，应当日配制使用。

4、DAB 显色工作液如何配制，可以提前配好备用吗？

按 1 滴色原加入 1 mL 缓冲液的比例配制，摇匀后立即使用。提前配制的工作液在室温下放置会逐渐显色失效，导致切片信号偏浅。显色时间按说明书控制在 5-10 分钟，并在显微镜下观察显色进程。

5、PolyDetector 检测系统能搭配其他品牌的一抗吗？

可以。该系统为通用型，适用于小鼠 IgG、小鼠 IgM 与兔源单克隆或多克隆抗体，对即用型与浓缩型一抗均可使用。不同抗体的适宜浓度与孵育时间需自行滴定，并以阳性与阴性对照确认结果。

6、p16 与 Ki-67 双标结果中两种颜色分别代表什么？

DAB 显色为棕色，定位 Ki-67 的细胞核信号。ALK Scarlet 显色为红色，定位 p16 的细胞核与胞质信号。两种颜色在同一细胞区域内同时出现时，表示两个靶标在该细胞上共表达。

7、Ki-67 阳性指数应该如何判读？

判读以细胞核出现明确棕色染色为阳性，计数所需细胞总数与阳性细胞数后取比值。计数区域应选在阳性细胞相对集中的热点区，并避开坏死、挤压与边缘伪影。判读规则需在科室内形成书面约定，保证不同人员之间的一致性。

8、上海起发实验试剂有限公司是 Bio SB 的授权代理商吗？

是。上海起发实验试剂有限公司为 Bio SB 的授权代理商，承担产品销售与技术支持工作。订购、报价与售后沟通均通过该代理商进行。

9、订购后货期一般如何安排？

货期取决于所选规格是否常备，以及运输与报关进度。常备规格的交付周期相对短，非常备或大包装规格需按批次安排。具体到货时间以代理商订单确认信息为准，不宜以下单日期直接推算。

10、出现染色偏弱或背景偏高时，售后支持能提供哪些排查方向？

可从修复方式、抗体浓度、阻断时间、显色时长与洗涤步骤逐项核对。需要时提供切片类型、货号、批次号与操作记录，便于比对说明书参数。涉及判读的疑问，应由具备资质的专业人员结合对照结果处理。

更多产品信息，请联系中国区域代理商：上海起发实验试剂有限公司

（注：本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，具体以品牌信息文档为准。）

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