prokazyme生产和销售用于研究，诊断和工业测试目的的新型酶。该公司成立于2006年，是冰岛生物技术公司Prokaria的副产品，该公司后来合并为非营利性国有企业Matis。Prokazyme基于二十年的地热生物勘探，微生物基因组学和酶发现。Prokazyme（作为中小企业）与马蒂斯组成了一个研究联盟，并共同参与了由欧盟资助的一些研究项目。持续的研发和与Matis的战略联盟使Prokazyme有机会开发大量不断增长的嗜热细菌和病毒基因数据库，并继续开发新的*酶产品。

Tsc DNA ligase from Thermus scotoductus

来自Thermus scotoductus的Tsc DNA连接酶

一种热稳定的NAD +依赖性双链DNA连接酶，在15至75℃的温度下具有活性。

来自Thermus scotoductus的 Tsc DNA连接酶是一种热稳定的NAD +依赖性双链DNA连接酶，其活性温度在15至75℃之间。该酶对平末端DNA的片段没有活性。 

与其他DNA连接酶相比，热稳定的Tsc DNA连接酶和Rma DNA连接酶（Dlig120）已显示出有利的性质。供参考，请考虑以下文件：

Housby和Southern 2002：  Thermus scotoductus和Rhodothermus marinus DNA连接酶比Thermus thermophilus DNA连接酶具有更高的连接效率。 肛门。生物化学。302：88-94 -  

Housby JN  等人。 2000.  通过热连接酶优化的寡核苷酸连接：将  Thermus scotoductus  和Rhodothermus marinus  DNA连接酶与其他嗜热连接酶进行比较。 核酸研究 酸性。 28：e10 - 

Thorbjarnardottir SH et  et al。1995年：  Rhodothermus marinus的DNA连接酶编码基因的克隆和序列分析，以及两种嗜热DNA连接酶的过量产生，纯化和表征。 基因 161：1-6 -

Jonsson Zo 等。1994：  所述的序列  的DNA  连接酶 -编码从栖热菌属scotoductus基因和保守基序中  的DNA  连接酶。 

基因 151：177-180 -  

产品Dlig119 Tsc DNA连接酶有500单位和2000单位以及10x反应缓冲液。

产品：Dlig119S | DNA连接酶500单位| 价格：220.00 EUR

产品：Dlig119L | DNA连接酶2000单位| 价格：320.00 EUR

产品描述

介绍：

Tsc DNA连接酶催化双链DNA结构中相邻3'-羟基和5'-磷酸末端的NAD依赖性连接。与T4 DNA连接酶相反，Tsc DNA连接酶对平末端DNA的片段没有可检测的活性。与T4 DNA连接酶不同，Tsc DNA连接酶在宜温度条件下仅显示小的连接活性，对于4bp以及2bp的粘性末端。Tsc DNA连接酶对RNA靶标没有活性。从携带质粒的大肠杆菌菌株中分离和纯化Tsc DNA连接酶，所述质粒具有来自冰岛分离的嗜热细菌Thermus scotoduc-tus的克隆DNA连接酶基因（1,2）。Tsc连接酶的半衰期在91℃下为26分钟（3）。该酶具有宽范围的反应温度，下限约为15℃，上限由DNA底物的解链温度（Tm）决定。该酶在7-9的pH范围内的各种DNA聚合酶缓冲液中也具有活性。在宜条件下，与其他常用的热稳定连接酶相比，Tsc DNA连接酶的寡核苷酸连接的速率和程度要高得多（4,5）。

应用：

Tsc DNA连接酶是一种理想的酶，适用于需要高温，高严格连接双链DNA的应用.Tsc DNA连接酶可用于：

• 用于扩增DNA靶标的连接酶链式反应（LCR）（6-8）。
• 用于突变分析的寡核苷酸连接测定（OLA）（9-10）。
• 重复扩增检测（11）用于确定遗传异常，例如三核苷酸重复，仅用于研究，不用于诊断目的（例如脆性X，亨廷顿病）。
• 基因合成（12）来自重叠的寡核苷酸。

储存：
储存和稀释缓冲液：20 mM Tris-HCl，50 mM KCl，0.1 mM EDTA，0.1％Triton X-100（v / v），1 mM二硫苏糖醇（DTT），50％甘油（v / v），pH 7,6（25℃）。Tsc连接酶在-15°C至-25°C的温度下保存稳定。

反应条件：
1×反应缓冲液（10x供应）20mM Tris-HCl，20mM KCl，10mM MgCl 2,0,1％Nonidet P40（v / v），0.5mM NAD，1mM DTT，pH 7 ，5（25°C）。

浓度和单位定义
浓度10 U /μl。一个单位的Tsc DNA连接酶催化在45℃下1分钟内1μgBstEII消化的λDNA的50％cos位点的连接。

应用方案：寡核苷酸连接的反应方案： 解冻下面列出的组分并将它们置于冰上。在设置反应之前，短暂涡旋并离心所有试剂。在放置在冰上的微量离心管中设置反应组分：

典型的温度曲线是：94℃2分钟，94℃30秒，45-65℃3分钟，并重复后两个温度30个循环。99°C，10分钟。

活性测定：
单位定义的酶测定法是用BstII消化的λDNA的cos位点的连接。

在45°C孵育1-15分钟。在干冰/乙醇浴中停止反应。在65℃下孵育10分钟，然后在琼脂糖凝胶上进行分析（未连接的cos位点熔化）

通过琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色测定结果。

质量控制：

质量控制：
每批ThermoPhageTM ssDNA连接酶测定活性和污染活性，如上所述。

缺乏DNA核酸内切酶：

• 将0.25μg超螺旋pBR322 DNA与增加量的Tsc DNA连接酶在25μl反应中于37℃温育16小时。> 100U的Tsc DNA连接酶显示pBR322 DNA的超螺旋结构没有松弛。

• 在25μl反应中，在37℃和64℃下，用Tsc DNA连接酶加入0.25μgλ-DNA Eco RI / HindIII片段16小时。100U Tsc DNA连接酶未显示条带图案的改变。

不含核酸外切酶：将增加量的Tsc DNA连接酶在含有[3H] - 标记的DNA的50μl测试缓冲液中于37℃和64℃温育4小时。显示无外切核酸酶活性的酶量> 100U。

缺乏Rnases：
来自Ambion的RNaseAlertTM实验室测试试剂盒（目录号1964）用于根据制造商的方案检测RNase活性。在1小时后37℃孵育Tsc DNA连接酶的XU后未检测到RNase活性。

参考文献：

• Jonsson ZO，et al。1994.Gene 151：177-80
• Kristjansson JK等。1995.系统。申请 微生物。17：44-50
• Thorbjarnardottir SH等人。1995.基因161：1-6
• Housby JN，et al。2000.核酸研究。28：e10。
• Housby JN，et al。2001.肛门。生物化学。302：88-94
• Landegren U等，1988。Science 241：1077-1080
• Landegren U，等1988. Science 242：229-237
• Barany F，1991。PCR Meth。和Appl .. 1：5-16
• Nickerson DA，et al。1990.Proc。国家科。科学院。科学。美国87：8923-8927
• Baron H，et al。1996. Nature Biotech 14：1279-1282
• Schalling M，et al。1993. Nature Genetics 4：135
• Sutton JR，et al。1992.转基因研究1：228

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