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NittoPhase®HL固相载体使用指南

 发布时间:2021/1/22 点击量:1957

NittoPhase®HL固相载体使用指南

NittoPhase®HL Solid Support是一种优化设计的支持药物级寡核苷酸高效合成的支持物。交联聚苯乙烯树脂具有高产率获得高质量寡核苷酸所需的几种优越性能,超过了市场上可用的各种其他支持的性能。已证明该支持可在小规模和大规模合成以及各种合成仪(包括OligoProcess™)中有效执行。

 

层析柱填充建议

 

 

(a) 固定床柱

注意:为避免合成仪的潜在机械问题,使用NittoPhase®HL干粉填充合成柱,仅使用规定体积的推荐量。

 

1. 选择具有所需装载物的NittoPhase®HL Solid Support。

 

2. 数量  of  NittoPhase®HLSolid  支持  在6.3 mL色谱柱中有效合成所需的量见下表。*

 

3. 使用下表中推荐用于合成的载体量,用干燥载体填充不锈钢色谱柱,连接色谱柱并启动合成程序。

 

表1. NittoPhase®HL固相载体装量建议。*

RNA合成

上样量(µmol/g)

装量(6.3 mL层析柱)

 

150

0.79 g

21聚体

200

0.74 g

 

250

0.69 g

 

DNA合成

上样量(µmol/g)

装量(6.3 mL层析柱)

 

300

0.83 g

20聚体

350

0.80 g

 

400

0.77 g

*对于其他尺寸的色谱柱,所需的装量与上文所列体积相比呈线性变化。色谱柱填充体积可能因寡核苷酸的长度和修饰而异。

(b) 可调列

1. 确定合成的规模。

2. 根据支承载荷计算所需NittoPhase®HL固相支承的量:

支撑物用量[g]= 规模[µmol]÷支撑物上样量[µmol/g]

3. 使用以下公式计算柱体积(CV):

CV[mL]= 支持量[g]÷0.109**

4. 使用以下公式计算柱高h:

h[cm]= 4 CV[mL]÷πd2 d为色谱柱直径(cm)

5. 将支架转移至色谱柱中,将活塞牢固调整至高度h。

6. 开始合成。

 

(c) 合成操作

1. 标准合成程序将适用于NittoPhase®HL Solid Support。

2. 合成完成后,使用标准去保护程序。用乙醇/水(1:1,v/v)冲洗载体以*回收。

3. 对于UnyLinker NittoPhase®HL,在55 ℃浓缩氢氧化铵中脱保护9-11小时足以进行UnyLinker裂解。

**基于250µmol/g的21聚体RNA。色谱柱填充量可能因寡核苷酸的长度和修饰而异。

 

NittoPhase®是Nitto Denko Corporation的商标。©2015 Kinovate Life Sciences Inc.版权所有。保留所有权利。本文提及的商标归Kinovate Life Sciences Inc.或其各自所有者所有。在美国印刷。KLS F005 0415

 

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