BMA的主要专长在于抗体在免疫组织化学和酶免疫测定（ELISAs）中的应用。生产*适用于没有胎牛血清的培养基。这不仅是对可持续性和动物福利的重要贡献，而且产品不含有污染的牛抗体。它们通常仅供体外研究使用，但支持向诊断领域的公司许可适当的产品。
BMA S-1007说明书
描述
S100A8 ELISA（钙粒蛋白A，MRP8）
应用
EIA和ELISA
价钱
瑞士法郎940.00 / 2×96测试
数量
2 x 96次测试
MRP8（S100A8）
酶免疫分析
用于生物液体中mrp8的特异性测定
测试说明
产品代码：S-1007
批号：23E1203
仅供体外和研究使用。
不适用于诊断应用。
试剂盒包含：2个预涂、干燥的微量滴定板和执行2x96测试的试剂。
到达后冷藏，不要冷冻。
简介和基本信息
替代名称：
MRP8:S100A8，钙粒蛋白A，CP-10（小鼠体内）
MRP14:S100A9，钙粒蛋白B
MRP8/14:钙保护素，L1，（P8,14），p34
迁移抑制因子相关蛋白（mrp）-8和-14属于钙的s-100家族
与骨髓细胞分化相关的结合蛋白。它们在静止期中性粒细胞、角质形成细胞（尤其是银屑病）、浸润性组织巨噬细胞和活动性炎症疾病的上皮细胞中高度表达。慢性或急性炎症中巨噬细胞亚群的异质性反映在mrp8和mrp14的不同表达上。表达mrp8和mrp14的吞噬细胞属于早期浸润细胞，而mrp8单独存在于慢性炎症组织中。mrp8、mrp14和ca2+依赖的mrp8/14杂合物的部分拮抗作用使它们成为多种介质。
功能
MRP8/14杂合物的一个主要功能是其抗菌活性（因此被称为钙保护素）。mrp8/14通过竞争锌抑制病原菌的生长。mrp8/14也可诱导某些肿瘤细胞凋亡。这些活性被zn2+和其他二价阳离子所消除，而不是被ca2+或mg2所消除。+
mrp8/14杂合物的另一个重要特性是其作为脂肪酸转运蛋白的*作用。ca2+依赖性脂肪酸-mrp8/14复合物是中性粒细胞中多不饱和脂肪酸的主要载体。复合物在静息细胞中表达，刺激后移向膜。Zn2+抑制生理性Zn2+血清浓度下MRP8／14的脂肪酸载体容量，从而在血液循环中不携带脂肪酸。
这使得mrp8/14成为钙信号传导和花生四烯酸效应之间的重要介质。
mrp8（和mrp8/14，但不是单独的mrp14）在炎症介质刺激下分泌。对中性粒细胞和单核细胞是一种有效的化学引诱剂。然而，mrp8不会增加细胞内ca2+，也不会引起氧化爆发和颗粒酶释放，如c。
将MRP8暴露于次氯酸盐（可能由活化的中性粒细胞产生）中，可将其转化为不活泼的二硫键二聚体。糖皮质激素通过炎症介质上调mrp8的诱导。MRP8可能有助于调节母胎之间的相互作用
解释为什么灭活小鼠的mrp8基因是胚胎致死的。
mrp14和mrp8在活化巨噬细胞中的共同表达缺乏，说明它们的作用不同。mrp14的c端序列与中性粒细胞固定因子的n端序列相同。mrp14可以磷酸化，从而提高其钙结合能力。然后它倾向于
从细胞溶胶转移到细胞膜和细胞骨架。mrp14被证明与具有转移增强能力的中性粒细胞亚群有关。
生物化学
人mrp8分子量为11.0kd，人mrp14分子量为13.3kd，截短12.9kd。ca2+诱导形成（mrp8）（mrp14）（简称mrp8/14），（mrp8）2（mrp14）和（mrp8/14）2的杂合物。上面各有两个EF手图案
MRP8和MRP14。mrp14对钙的亲和力高于mrp8，而cterminal-ef2的亲和力高于n末端ef1。c端结构域也主要决定了二聚反应的特异性。ef2中的螺旋结构在钙结合时发生了很大的构象变化，可能是钙诱导构象的一个触发因素。
改变。
mrp8/14的抗菌活性是由锌螯合作用引起的。
mrp14的c端被zn2+逆转。两个亚单位都没有显示出抗菌作用
活性本身，表明钙诱导的二聚反应导致多组氨酸序列的暴露改变。
ca2+诱导花生四烯酸和多不饱和脂肪酸与mrp8/14的结合是通过影响钙依赖性脂肪酸结合囊的构象而被zn2+或cu2+阻止的。大脂肪酸结合发生在等摩尔浓度的mrp8和mrp14和
每个EF手的值大于3个钙离子。
病理学意义
mrp8/14和mrp14通常与急性炎症相关，mrp8与慢性炎症相关。与其他疾病标记物相比，mrps的诊断价值和优势在于它们在相应细胞群激活后立即被制备和释放。其他
标记物可能在下游事件中产生，或者需要在肝脏中从头合成。
不同条件下，mrp8/14杂合物水平与疾病活动有显著相关性。然而，mrp8亚单位水平的变化很少受到关注。
-粪便mrp8/14水平预测炎症性肠病的复发，并区分健康对照组、无或低疾病活动性患者和活动性疾病患者。
-血浆mrp8/14水平可能是肾移植急性排斥反应的标志物。
-血清mrp8/14浓度是酒精性肝硬化复发感染和低生存率的预后指标。
-血清，尤其是滑液中mrp8/14的浓度与类风湿关节炎的疾病活动密切相关。sle患者血清mrp8/14水平高于健康对照组，与疾病活动、抗dna抗体的存在以及关节炎的发生有关。
-mrp8和mrp14可在年龄相关性脑改变和神经退行性疾病中检测到。在脑疟疾中，小胶质细胞的活化和mrp8/14的检测在整个大脑中广泛存在。
-mrp8（原称囊性纤维化（cf）抗原）是cf炎症的一个指标，在cf患者的肺和血清中有组成性表达，在没有急性不适或发热的患者血浆中有升高。lps在cf中诱导mrp8的作用比正常人明显。
-mrp8/14存在于尿路结石和牙石中。龈沟液中mrp8/14水平与其他牙周病标志物有较好的相关性，有助于评价牙周炎症的程度。
试验原理
一步非竞争夹心法，过氧化物酶催化试剂限制
四甲基联苯胺显色反应，包括停止反应和在450/630nm处在多点读板器中读取。
提供的试剂
S-1007A：准备使用预涂和稳定的微量滴定板+板封闭剂（每个2个）。
s-1007b 500ng标准品，重组mrp8的稳定冻干制剂。
S-1007D分析缓冲液，3倍浓缩。红色溶液。
S-1007E四甲基苯甲酰-H2O2溶液。保持在黑暗中。
S-1007F TMB底物缓冲液（柠檬酸钾）
S-1007R试剂混合物：2.1毫升含有HRPO偶联检测抗体的混合物，
11倍浓缩
该试剂盒至少在冷藏保存的日期前是稳定的。
未提供的材料：停止溶液（1N硫酸，见下文）、稀释用塑料管、清洗用等渗盐水、移液管、重复移液管、8通道移液管（2）、微孔板清洗机和读取器（450nm/630nm过滤器）。
开始分析前的准备工作让所有试剂在开始前预热到室温。强烈建议对样品和标准进行重复测试。准备除TMB以外的所有下列稀释液
开始分析前的底物溶液
测定缓冲液
用2份蒸馏水稀释1份封闭浓缩液（S-1007D）以获得分析缓冲液。例：量取浓缩液15ml，加水30ml。
标准：
用1.0ml试液重建冻干标准品。*涡流几次，持续10秒，中间孵育几分钟。此500ng/ml标准品现在可以进一步稀释。如有必要，将本标准中未使用的部分储存在-20℃以备进一步使用。
稀释液：-在五个1.5ml聚丙烯管上贴上“25”、“5”、“1”、“0.2”和“0.04”的标签。
-在“25”管中加入950微升分析缓冲液，在其他四个管中加入400微升分析缓冲液
-向“25”管中加入50微升500ng/ml储备溶液，进行连续稀释。充分混合，将100微升该溶液转移到“5”管中，并通过始终按降序将100微升转移到下一个管中继续进行连续稀释。这提供了五个标准解决方案，用于生成具有重复标准的标准曲线。
试剂混合物（工作稀释）
用10份分析缓冲液稀释1份封闭的试剂混合物（S-1007R）。示例：如果处理四个含有32个孔的试纸条（每个孔将得到100微升），则将0.32ml试剂混合物添加到3.2ml分析缓冲液中。根据你的需要调整这个音量。
样品：
在-20°C或更低温度下将样品分批储存。尽量避免样品的冻融循环，并在适当稀释的分析缓冲液中稀释样品。血清或血浆应按1:5稀释。
示例：在台式离心机中旋转样品5分钟，然后将100微升添加到400微升分析中
Buffer。滑液用1:20-1:1000；呼气、唾液、bal和尿液用1:2。
等渗盐水：
在1升去离子水或类似质量的水中溶解9g NaCl。
TMB基质溶液：使用前立即制备。对于整个板，将20毫升基质缓冲液（S-1007F）与1毫升基质原液（S-1007E）混合。准备后15分钟内使用。
停止解决方案
将硫酸稀释至1N的浓度。示例：向100ml中添加2.9ml 95-97%的硫酸
水（按此顺序）。95-97%浓硫酸（比重1.84）为36N。
溶液宜在开始分析前制备。
试验程序
1。向每个孔中加入100μl稀释试剂混合物（见上文）。重复吸管配药
如果使用多个色谱柱，100微升方便。
2a.向1号柱下井加入100μl的25ng/ml（“25”）至0.04ng/ml（“0.04”）标准溶液。
和2，如下所示。包括两个空白（如果使用重复的样本），得到
100μl分析缓冲液。
2b.将100μL适当稀释的样品加入相应的孔中。
三。室温下在潮湿环境中培养90分钟。
4。用等渗盐水清洗盘子3次。用柔软的吸水纸吸干。
此时稀释TMB基质溶液，准备好停止溶液和8通道移液管
及时停止颜色反应。
5。向每个孔中加入200μL稀释的TMB基质溶液。在室内孵育3分钟
温度。当MRP8存在时，发生蓝色反应。
6。通过向每口井中加入100μl停止溶液来停止颜色反应。颜色由蓝色变为
黄色的。注意：停止溶液含有1N硫酸，具有腐蚀性，会导致灼伤。
如果与眼睛接触，立即用大量水冲洗并就医。
7。在大约15分钟内，读取450nm处的吸光度，如有可能，参考设置为630nm。
建议的板设置：
可选择下列板布置，其中100至0.39为标准稀释液从100ng/ml到0.39ng/ml，如上所述。SA-1至SA-40为重复样品。
CONT是指具有已知MRP8含量的对照血清（不包括在试剂盒中）。
计算
方法由复制品形成，样品中的含量由标准曲线通过微型板计算软件（如Softmax、分子装置）或手动计算得出。超出标准范围的样品稀释应使用适当的稀释液重复。
局限性和不相容性
不应混合来自不同批次或不同分析的成分。
血清和血浆样本可以给出可比的结果。然而，血液样本需要在提取后立即冷却，并立即分别处理成血浆或血清。
室温和孵育时间或多或少影响所有反应。如果某些值偏离刻度（E450nm>3.0），我们建议从每个孔中取出相同体积的溶液（例如100μL），并重新测量板。
结果的解释
mrp8/14的循环水平是一个很好的病理指标。此外，循环亚单位mrp8和mrp14的水平也可以测量，并可能为疾病的发病机制提供有趣的线索。mrp亚家族正常范围的测定
血清或血浆中：
MRP8／14复合物的浓度是炎症的严重程度的指示（值＞100000 ng/ml）已在血清和血浆中测定。c-反应蛋白（crp）和其他炎症标志物并不总是与mrp8/14相关，因为mrp的水平比crp等急性期蛋白的水平升高更早。
mrp8/14低于正常水平（<100ng/ml）可能提示粒细胞分化障碍。
MRP8浓度升高表示慢性炎症。研究表明，93%的类风湿关节炎患者mrp8值升高。然而，mrp8水平在急性炎症如活化性关节炎和细菌感染的正常范围内。
急性炎症，如细菌感染的特征是：
正常MRP8浓度
正常至升高的MRP14浓度
高浓度MRP8／14复合物（＞3000～100000 ng/ml血清）
慢性炎症，如类风湿性关节炎的特征是：
高浓度MRP8
高mrp14浓度
略微升高的MRP8/14杂合物浓度。mrp8/14浓度在慢性炎症的急性期明显升高。
病毒感染不会导致mrp8/14浓度升高。胰腺炎患者的茜拉没有显示MRP8／14血清浓度升高。
糖皮质激素免疫抑制治疗使mrp8/14杂合物水平恢复到正常范围
