PolyPlus jetCRISPR产品
| 试剂 | jetCRISPR™ |
|---|---|
| 分子交付 | 核糖核蛋白：指导RNA和Cas蛋白（Cas9，Cpf1） |
| 应用 | CRISPR介导的基因组编辑 |
| 细胞类型 | 贴壁细胞和悬浮细胞 |
| 转染数 | 1.5 ml jetCRISPR™转染试剂足以在24孔板中进行1250次转染，或在6孔板中进行300次转染 |
| 存储 | 5°C±3°C，适当存放可稳定6个月（502-01）至至少一年（其他包装尺寸） |
CRISPR / Cas工程核酸酶系统是功能强大且高度特异性的基因组编辑工具。CRISPR / Cas是具有指导RNA（gRNA）分子的两组分系统，该分子驱动Cas核酸酶（Cas9，Cpf1）到基因组内的特定目标序列，以引入遗传修饰（突变，插入或缺失）。
jetCRISPR™是一种创新试剂，专门设计用于在CRISPR / Cas9和CRISPR / Cpf1实验中提供RNP。jetCRISPR™带来了很高的CRISPR基因组编辑效率，同时保持了出色的细胞活力和转染后的形态。使用先进的技术进行CRISPR / Cas9和CRISPR / Cpf1 RNP递送！
| 产品 | 参考编号 | 产品尺寸 |
|---|---|---|
| jetCRISPR™ | 502-01 | 0.1毫升 |
| jetCRISPR™ | 502-07 | 0.75毫升 |
| SpCas9核酸酶 | 722-100 | 100微克 |
1.5 ml jetCRISPR™转染试剂足以执行约 在6孔板中进行300次转染。
jetCRISPR™是专为RNP（指导RNA和Cas9蛋白复合物）的高转染效率而设计的，因此可在不同细胞类型中的多种靶标上实现cas9介导的高基因组编辑效率（图1和2）。
图1：在HeLa细胞中使用jetCRISPR™实现高基因组编辑效率。在96孔板的每孔中，使用几种RNP浓度的SpCas9核酸酶和HPRT1 sgRNA或阴性对照与0.3 µl jetCRISPR™试剂结合在HeLa细胞中进行RNP转染。在48小时后转染，T7消化产物在2％琼脂糖凝胶上运行，并与由G显示BET染色：箱透（Syngene公司®）。收购均与Genesnap软件进行（Syngene公司®）和INDEL的量化用的Genetools软件（Syngene公司执行®）。1：1083 bp的未切割片段； 2：827 bp的长切割片段； 3：256 bp的短切割片段。
jetCRISPR™转染试剂的基因编辑效率比其他竞争对手更高，这使其成为CRISPR应用的优选产品。
图2：在用阳离子脂质体比较jetCRISPR™获得了优异的基因组编辑效率® CRISPRMAX™。RNP转染的A549和用30nM的RNP（SpCas9核酸酶和HPRT1因组）与jetCRISPR™试剂的0.3微升或0.3微升的Lipofectamine HEK-293细胞中进行® CRISPRMAX™，每一个96孔板的孔。转染后48小时，通过使用T7核酸内切酶方法计算INDEL的百分比（％）来评估基因组编辑。该INDEL％是通过使用Genetools软件（Syngene公司确定®）。
在Polyplus-transfection中，我们很自豪能使用对细胞极为温和的试剂，在整个实验过程中保持出色的细胞活力和形态。jetCRISPR™与血清和抗生素均兼容，因此可以在健康细胞的宜条件下进行RNP转染（图3）。
图3：jetCRISPR™转染后48小时的细胞活力和形态极棒。使用30 nM RNP（SpCas9核酸酶和HPRT1 sgRNA）在96孔板的每孔中用0.3 µl jetCRISPR™试剂对HEK-293和A549细胞进行RNP转染。在48小时后转染，细胞形态由相衬ZOE荧光细胞成像可视化（BIORAD ®）。
直接将Cas9作为蛋白质而不是质粒进行传递，可以轻松进行基因组编辑，因为该蛋白质易于使用。使用jetCRISPR™传递Cas9蛋白和gRNA可以实现快速可靠的基因编辑（图4）。此外，Cas9蛋白从细胞中清除的速度将比质粒更快，因此可将脱靶效应降至低，并实现更具体的基因组编辑（Kim S等人；Genome Research 2014； 24：1012-1019）。
图4：用jetCRISPR™获得的HEK-293细胞快速，可靠的基因编辑效率。使用30 nM RNP（Cas9蛋白和HPRT1 sgRNA）在96孔板中每孔加0.3μljetCRISPR™试剂在HEK-293细胞中进行RNP转染。通过使用T7核酸内切酶方法计算INDEL的百分比（％），可以在不同时间点评估基因组编辑。该INDEL％是通过使用Genetools软件（Syngene公司确定®）。
jetCRISPR™是作为即用型解决方案提供的。现在，转染RNP是一个非常简单的过程，只需几个步骤：形成RNP复合物，添加转染试剂并添加到孔中！
反向转染和正向转染都非常适合与jetCRISPR™一起使用，因此使您可以调整方案以适合您正在处理的细胞，板的形式以及分析时间。通过使用反向协议（图5），数据将比使用正向协议的日期早一天。
图5：jetCRISPR™反向方案
技术支持专家Alengo Nyamay'antu（PhD）介绍了基因组编辑中的转染趋势。她概述了将引导RNA和Cas9核酸酶同时传递到细胞中的解决方案。
