上海起发现货progen PRAAV8说明书

AAV8滴定ELISA

*的微量滴定板酶免疫分析法可定量检测完整的AAV8 wt病毒体，AAV8重组病毒体或人腺相关病毒8的已组装和完整的空衣壳。捕获抗体可检测未组装的衣壳蛋白上不存在的构象表位。

ELISA原理：

该测定基于夹心ELISA技术，其中将对组装的AAV衣壳上的构象表位具有特异性的单克隆抗体（mab）涂在板上，并用于从样品中捕获AAV颗粒。

捕获的AAV颗粒的检测过程分为两个步骤。

1. 生物素偶联的单克隆抗体与捕获的AAV颗粒结合。
2. 链霉亲和素过氧化物酶偶联物与生物素分子反应。底物的添加导致显色反应，其与特异性结合的病毒颗粒的量成比例。

AAV定量方法的比较：

每种常用的量化方法各有利弊：

• qPCR已被广泛使用，但存在一些问题，例如样品制备，引物设计或PCR效率，这些问题可能导致实验室间结果之间的高度差异。
• 数字液滴PCR方法克服了qPCR的某些局限性。但是，由于不同的样品处理方案，实验室之间仍然可能发生变化。
• 如果使用可靠的参考材料，则斑点印迹是一种简单且定量的方法。然而，它通常受蛋白质印迹的线性和动态范围的限制。

考虑到上述技术的实际缺陷，目前常规的夹心ELISA在实验室间和实验室间的变异以及易于使用方面似乎是优越的。因此，它代表了可靠和可再现的总rAVV衣壳滴度定量的宜格式。

改组/变异的AAV的使用：

改组/突变的AAV载体的识别取决于受改组/突变影响的特定衣壳区域。用于PROGEN的AAV ELISA的捕获抗体结合特异性的（在某些情况下还定义为良好的构象表位）。这些表位是由相应的AAV血清型的衣壳组件产生的。ELISA可能识别您的改组/突变的AAV载体的迹象是抗体结合表位的存在。然而，衣壳蛋白的蛋白质序列的变化也可能影响蛋白质的构象，因此，AAV衣壳上呈现的表位的构象。这可能会影响抗体的结合亲和力，并影响基于AAV ELISA试剂盒提供的（非改组）试剂盒对照的效价测定。由于这些属性在很大程度上取决于所执行的特定改组/突变，因此PROGEN无法保证对改组/突变的AAV向量进行成功且的定量。即使改组/突变的AAV衣壳上仍存在抗体结合表位，也需要针对您的特定AAV载体测试和优化您的检测方法。

PROGEN强烈建议您生产和校准合适的（改组/突变）试剂盒对照品，以确保使用PROGEN ELISA试剂盒可靠地确定滴定的AAV载体的滴度。

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