上海起发neuroprobe现货产品

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Protocol for using the ChemoTx® System

ChemoTx® 一次性趋化系统 ChemoTx 系统是标准微孔板格式的一次性趋化/细胞迁移室，96 孔或 384 孔。它与大多数荧光和密度测定酶标仪，以及大多数液体分配机器人兼容。目前有 3 个平板可用，2 个为 96 孔板，微孔体积为 30 或 300µ，1 个为 384 孔板，微孔体积为 10µ。均由组织培养级透明聚苯乙烯制成。聚碳酸酯轨道蚀刻 (PCTE) 过滤器粘合到金属框架上，并在每个测试部位周围选择性地涂上疏水掩模。这种面罩允许将细胞悬液直接移液到过滤器顶部的位点上，在那里它呈半球形液滴，从而消除了上层孔的需要。过滤器底部和板边缘之间的密封也由疏水面罩提供，消除了垫圈和夹紧硬件。通过这种设计，顶部和底部液体中的气泡截留小化：在顶部，因为没有“孔”截留气泡；在过滤器下方，因为孔边缘和过滤器底面之间的密封是水密封，而不是蒸汽密封，因此气泡可能逸出。

使用 Neuro Probe 96 孔 ChemoTx® 系统填充微孔板的方案 ChemoTx®96 孔微孔板含有 30µL 或 300µL 液体。使用 300µL ChemoTx® 板时，请参考括号中的体积。移液器，尤其是多通道移液器实际分配量的变化可能相当大。为了帮助弥补这一点，ChemoTx® 微孔板设计有碟形边缘。这种微孔边缘设计允许每个微孔中的体积在 27µL-31µL (295µL-303µL) 之间，且结果良好。相应地，将移液器设置为 29µL (299µL)，以便即使在递送体积变化±2µL (±4µL) 后，您仍处于正确范围内。当微孔中的体积在 27-29µL (295-299µL) 之间时，应用后过滤器下似乎会截留气泡。从上方观察时，微孔将是这样的：然而，这不是一个捕获的气泡。孔边缘和过滤器底部之间的密封仅为水封，而非空气密封。因此，当用移液器将细胞悬液吸取到过滤器顶部时，1-2μl 培养基 (1-5μl) 可流经过滤器并置换空气

过度灌装如果微孔过度灌装，应用过滤器迫使过量液体溢出边缘并破坏水性密封件。然后，当您将细胞悬液添加到过滤器顶部时，孔可能会泄漏。下图表示过度填充微孔的后果：n 填充不足如果您向微孔中移取的液体太少，过滤器的底面将不会接触液体。这可防止细胞悬液与微孔板中的液体接触，并捕获孔中的空气，防止扩散和迁移。n 故障排除我们建议您的移液器初始设置为 29µL (299µL)。然而，由于每个移液器不同，您可能需要优化移液器设置。填充一列孔并应用过滤器。查看过滤器顶面，查看过滤器与孔中液体接触区域周围是否有干燥的环状物。如果微孔中的液体与过滤器之间没有接触，则它们被填充不足。如果有液体溢出边缘的井，则它们被过度填充。调整移液器设置，以补偿这些问题的出现。如果您正在使用多通道移液器，并且您在同一列中同时存在这两个问题，则：a）一个或多个吸头与移液器之间存在泄漏；b）一些吸头上的污染导致液体分配不均；c）您的移液器太不准确，无法与 ChemoTx® 配合使用，或 d）上述几项。如果 a），重新固定移液器吸头；如果 b），加载新的干净吸头；如果 c）或 d），尝试使用不同的移液器。

如果在几个微孔上偶尔发生轻微填充不足，可以通过使用干净的圆形末端玻璃搅拌棒（或类似仪器）轻轻向下推动过滤器顶部，直至过滤器与液体接触来克服。一旦接触，当在过滤器顶部移液时，细胞悬液中的液体将取代微孔顶部的空气。质控品除正常阴性质控品外，我们还建议将已知使用的细胞悬液系列稀释液移液到一行或一列孔中。在这些微孔上方的过滤部位，请勿移取细胞悬液。在这些孔中移取与过滤器顶部位置相同体积的液体为方便。如果您正在使用 30µL 微孔板上具有 5.7 mm 微孔位点的过滤器，则必须对该技术进行体积调整。读取平板读数时，该连续稀释度作为标准或度量，与实验孔读数进行比较。例如，如果实验中每个位点使用 10000 个细胞，则吸取 10000 个细胞到 A1 中，5000 个细胞到 B1 中，2500 个细胞到 C1 中，…，78 个细胞到 H1 中。定位滤器并添加细胞悬液当微孔板上加载化学引诱物和对照物时，将有框滤器置于其上方，并将滤器框架角落的孔与微孔板上的四个针头对齐。确过滤器上的 A1 位点位于微孔板上的 A1 孔上。向下用力按压框架的四个角，直到其紧贴在微孔板边缘。注意框架必须与板的周缘接触才能正常工作。（参见上述照片。）
 

有框滤波器也有两种配置。直径为 3.2 mm 的部位暴露面积为 8 mm2，而直径为 5.7 mm 的部位暴露面积为 25 mm2如果您使用的是 3.2 mm 的位点，则用移液器吸取 20µL-25µL 细胞悬液至每个位点（上述推荐的任何连续稀释孔除外）。如果您使用的是 5.7 mm 部位，则移取 50µL-60µL 细胞悬液。垂直握住移液管，缓慢均匀地挤出细胞悬液。我们推荐一种作用缓慢、平稳的移液器；电子多通道移液器是该应用的理想选择。请使用这些面积和体积数据，结合下表中的孔隙密度，确定待加载的适当细胞数量和适当的细胞浓度。孔径孔隙密度 2µm 2 x 104 孔/mm2 3µm 2 x 104 孔/mm2 5µm 4 x 103 孔/mm2 8µm 1 x 103 孔/mm2 10µm 1 x 103 孔/mm2 12µm 1 x 103 孔/mm2 读取 ChemoTx® 过滤器和微孔板孵育后，取下盖子，过滤器仍在原位，取出细胞悬液。这可以通过使用实验室湿巾吸干来完成。然后用小刮匙型细胞收集器或棉签轻轻擦拭过滤器顶部的细胞。在水槽或容器上以 45° 的角度固定微孔板和连接的过滤器，并使用介质小心冲洗过滤器的顶面。将培养基应用于过滤器的顶部边缘，并使其轻轻流过过滤器表面。目标是从顶面去除未迁移的细胞，而不干扰已通过过滤器迁移的细胞。