E-GL01
N-乙酰氨基葡萄糖苷酶从复杂的碳水化合物和糖蛋白上裂解所有非还原性的末端β-连接的N-乙酰氨基葡萄糖残基。
N-乙酰氨基葡萄糖苷酶从复杂的碳水化合物和糖蛋白上裂解所有非还原性的末端β-连接的N-乙酰氨基葡萄糖残基。
GlcNAc在双天线,三天线和四天线寡糖上的不同键的切割速率很大程度上取决于相邻残基的空间位阻。与β(1-3)-连接的甘露糖相连的β(1-2)GlcNAc残基以高的速率裂解,而与β(1-6)-连接的甘露糖相连的β(1-2)GlcNAc残基在2000年以高的速率裂解。所有三种低聚糖的比率低。β(1-6)GlcNAc残基(如果存在)以第二高的速率去除,而β(1-4)GlcNAc则以第三高速率去除。在三天线结构上,该残留物以第二高速率被去除。与β-连接的甘露糖连接的二等分的β(1-4)GlcNAc严重阻碍了其他GlcNAc残基的裂解-裂解需要高浓度的酶和延长的孵育时间。
来源:重组从肺炎链球菌在大肠杆菌。
EC: 3.2.1.52
替代名称: β-N-乙酰氨基葡糖苷酶,N-乙酰-β-d-氨基葡萄糖苷N-乙酰氨基葡糖水解酶,氨基葡萄糖苷酶,己糖苷酶
内容物:
20 mM Tris-HCl,25 mM NaCl,pH 7.5中的N-乙酰氨基葡萄糖苷酶
5x反应缓冲液250 mM磷酸钠,pH 5.0
比活度: > 80 U / mg
活度: > 50 U / mL
分子量:〜140,000道尔顿
pH范围: 5-7,宜5.0
建议用法:
1.在试管中加入多达100 µg糖蛋白或1 nmole寡糖。
2.用去离子水将终体积调整为14 µL。
3.加入4 µL 5x反应缓冲液(pH 5.0)。
4.加入2 µL N-乙酰氨基葡萄糖苷酶。
5.在37°C下孵育3小时。
注意:如果存在平分的GlcNAc或β(1-2)GlcNAc- α(1-6)Man,则将孵育时间延长至18小时。
特异性:切割所有非还原性末端β-连接的N-乙酰氨基葡萄糖。平分GlcNAc会使反应变慢。
比活测定:定义为在37℃,pH 5.0下从对硝基苯基-β-DN-乙酰氨基葡萄糖生成1 µmol对硝基苯酚(p NP)所需的酶量。
储存:将酶储存在4℃。
纯度:每批N-乙酰氨基葡糖苷酶均按以下方法污染蛋白酶。将10 µg变性的BSA与2 µL酶孵育24小时。经处理的BSA的SDS-PAGE分析未显示降解迹象。
生产宿主菌株已经过广泛测试,不会产生任何可检测的糖苷酶。
稳定性:妥善存放至少12个月即可稳定。几天暴露于环境温度不会降低活性。
配套产品:
过程控
清洗糖浆-外糖苷酶处理后从糖浆混合物中去除酶
标记和释放聚糖的衍生化
1.弗吉尼亚州克拉克,N。Platt和TD Betters。肺炎链球菌β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因的克隆和表达。具有修饰的糖苷配基特异性的截短酶的产生。 生物化学杂志270:8805-8814(1995)。
2. Dwek,RA,CJ Edge,DJ Harvey,MR Wormald和RB Parekh。糖蛋白相关寡糖的分析。Ann Rev Biochem 62: 65-100(1993)。
3.格拉斯哥,LR,JC保尔森和RL希尔。从肺炎链球菌 的五个糖苷酶的系统纯化J Biol Chem 252: 8615-8623(1977)。
4. Kobata,A 。内切和外切糖苷酶在糖缀合物结构研究中的用途。Anal Biochem 100: 1-14(1979)。
5. Prime,S.,J。Dearnley,AM Venton,RB Parekh和CJ Edge。基于外切糖苷和内切糖苷酶消化的寡糖测序以及产物的液相色谱分析。 Chromatogr A 720: 263-274(1996)。
试剂盒包括酶加反应缓冲液。
足以进行多达60个反应