单位定义：

• 一个单位的 TGIRT ® -III 逆转录酶 (RT) 活性是使用 poly(rA)/oligo(dT) 42作为底物在 60°C 下在 1 分钟内聚合 1 nmole dNTP 所需的酶量。

酶浓度：

• 200 单位/微升

酶储存缓冲液：

• 20 mM Tris-HCl (pH 7.5)、500 mM KCl、1 mM EDTA、1 mM DTT、50% 甘油

酶特性和新活性：

• 比逆转录病毒逆转录酶具有更高的热稳定性、持续合成能力和保真度，允许从高度结构化或高度修饰的 RNA （例如 tRNA）和包含富含 GC 重复扩增的 RNA合成全长、端到端的 cDNA 。1-9,12,15,18

• 新型端到端模板转换活动，可在逆转录过程中连接 RNA-seq 或 PCR 接头，无需单独的 RNA 3'-接头连接步骤。1这种模板转换活动极大地促进了链特异性 RNA-seq 文库的构建，与使用随机六聚体引物或使用 RNA 连接酶进行接头连接的程序相比，偏差更小。1,7,8

• 从退火引物高效合成 cDNA。退火引物的预测 T m应大于 60 o C。建议将酶与反应混合物中的底物在室温下预孵育 30 分钟，并通过添加 dNTP 开始反应。新应用的最佳条件应通过测试 25 至 450 mM NaCl 的盐浓度范围来确定。

酶的建议用途：

1. 全面的链特异性转录组分析。8

2. 全细胞、外泌体、血浆和其他无细胞 RNA 的 RNA-seq。7、8、15

3. miRNA、tRNA 和其他小的非编码 RNA 的分析。1-9,12,15

4. RIP-seq、HITS-CLIP、irCLIP 和 CRAC，​​用于表征 RNA-蛋白质相互作用和核糖体分析。1,10,11

5. 通过高通量测序鉴定 RNA 碱基修饰。4、5、13、14

6. 使用 SHAPE 和 DMS 修饰等方法进行全基因组或靶向 RNA 结构映射。1,16

7. 富含 GC 的重复扩增的逆转录和定量。18

8. 长 cDNA 的合成。1

9. RT-qPCR。1

10. 单链 DNA 序列。17

11. FFPE肿瘤样本分析（咨询InGex技术支持）。

酵素的优点：

1. 全面的链特异性转录组分析。

与非链特异性 TruSeq v2 相当且优于链特异性 Tru-Seq v3，TGIRT®-seq 的 ribodepleted、碎片化通用人类参考 RNA 样本概括了人类转录本和掺入的相对丰度。TGIRT®-seq 明显比 TruSeq v3 更具链特异性，并消除了 TruSeq 固有的随机六聚体引发的采样偏差。与 TruSeq 相比，TGIRT®-seq 显示出更均匀的 5' 到 3' 基因覆盖并识别出更多的剪接点。TGIRT®-seq 能够同时分析同一 RNA-seq 中的 mRNA 和 lncRNA 作为结构化的小 ncRNA，包括 TruSeq 数据集中基本上不存在的 tRNA。8

2. 全细胞、外泌体、血浆和其他细胞外 RNA 的 RNA-seq。

快速处理时间（通过 PCR 步骤构建 RNA-seq 文库<5 小时）；需要少量 RNA（低 ng 范围）；全面的转录谱，包括 mRNA 和 lncRNA 以及小 ncRNA，包括 tRNA、pre-miRNA 和其他结构化小 ncRNA 的全长读数；比传统方法更少的偏见和更高的链特异性。7、8、15

3. 在 RIP-seq、HITS-CLIP、irCLIP、CRAC、核糖体分析等方法中，通过 TGIRT® 模板切换构建 RNA-seq 文库。

快速处理时间（通过 PCR 步骤构建 RNA-seq 文库<5 小时）；需要少量 RNA（低 ng 范围）；不需要 RNA 连接酶，程序中的步骤更少，偏差更小，效率更高。1,10,11

4. 比逆转录病毒 RT 具有更高的热稳定性、持续合成能力和链置换活性。

• 使用锚定 oligo(dT) 引物构建多腺苷酸化 RNA 的 RNA-seq 文库，其 5' 到 3' 覆盖率比没有核消耗步骤的逆转录病毒 RT 更均匀。1
• 通过毛细管电泳的基于的方法状或DMS结构映射以使RNA结构映射显著升onger阅读长度和过早停止比逆转录病毒RT更少。1,16
• 能够分析包含富含 GC 的重复扩增的 RNA 模板。18
• 能够从 tRNA 和其他小型结构化/修饰的 ncRNA 合成全长、端到端的 cDNA，这些 ncRNA 对逆转录病毒 RT 无效。4-9,12-15     

5. 人血浆和大肠杆菌 基因组DNA 的ssDNA-seq 。

通过直接在 DNA 链的 3' 末端启动 DNA 合成，同时连接 DNA-seq 接头，无需末端修复、拖尾或连接，从而以更简单的工作流程捕获精确的 DNA 末端。能够分析核小体定位、转录因子结合位点、DNA 甲基化位点和起源组织。17