套件内容清单：

TGIRT 试剂盒内容（10 次反应或 25 次反应）：

TGIRT ® -III酶，1×10米升（KTGIRT-10）或3×10米升（KTGIRT-25）

10X引物混合物50米升（PM-110）

10 x DTT，50毫升(D-121)

5 x 反应缓冲液，100毫升(RX-120)

• 该试剂盒包括TGIRT ® -III 酶、RNA 和 DNA 寡核苷酸的混合物，可退火形成 R2 RNA/R2R DNA 异源双链体，其中包含第一个接头序列、二硫苏糖醇 (DTT)和反应缓冲液以进行 TGIRT ®模板- Illumina RNA-seq 和 ssDNA-seq 分析的转换反应。7,8,9,10,12该试剂盒能够合成 RNA 模板的 cDNA 拷贝，其中第一个 RNA-seq 接头与 cDNA 的 5' 末端无缝连接。对于 RNA-seq 文库构建，DNA 寡核苷酸（单独购买）包含在PCR 扩增之前，必须使用耐热 5'AppDNA/RNA 连接酶（新英格兰生物实验室；M0319S 或 M0319L）将第二个 RNA-seq 接头序列添加到 cDNA 的 3' 末端。

我可以做哪些实验？

1. 全面的链特异性转录组分析。8

2. 全细胞、外泌体、血浆和其他无细胞 RNA 的 RNA-seq。7、8、15

3. miRNA、tRNA 和其他小的非编码 RNA 的分析。1-9,12,15

4. RIP-seq、HITS-CLIP、irCLIP 和 CRAC，??用于表征 RNA-蛋白质相互作用和核糖体分析。1,10,115。

5. 通过高通量测序鉴定 RNA 碱基修饰。4、5、13、14

6. 单链 DNA 序列。16

7. FFPE肿瘤样本分析（咨询InGex技术支持）。

这就是您应该使用 TGIRT 的原因：

• 比逆转录病毒逆转录酶具有更高的热稳定性、持续合成能力和保真度，允许从高度结构化和/或高度修饰的 RNA（例如，tRNA）和含有富含 GC 重复扩增的 RNA 合成全长、端到端的 cDNA。1-9,12,15,17
• 新颖的端到端模板切换活动，可以在逆转录过程中连接 RNA-seq 或 PCR 接头，并且无需单独的加尾或 RNA 3'-接头连接步骤。1这种模板转换活动大大地促进了链特异性 RNA-seq 文库的构建，与使用随机六聚体引物或使用 RNA 连接酶进行接头连接的程序相比，偏差更小。1,7,8
• 能够从低至 2 ng 的 RNA 输入生成全面的配置文件。7,15
• 从 RNA 模板到 PCR 产物的 RNA-seq 文库构建耗时不到 5 小时。7、8、15

TGIRT 更适合通过 TGIRT 模板切换构建 RNA-seq 文库：

1. 全面的链特异性转录组分析。

与非链特异性 TruSeq v2 相当且优于链特异性 Tru-Seq v3，TGIRT®-seq 的 ribodepleted、碎片化通用人类参考 RNA 样本概括了人类转录本和掺入的相对丰度。TGIRT®-seq 明显比 TruSeq v3 更具链特异性，并消除了 TruSeq 固有的随机六聚体引发的采样偏差。与 TruSeq 相比，TGIRT®-seq 显示出更均匀的 5' 到 3' 基因覆盖并识别出更多的剪接点。TGIRT®-seq 能够同时分析同一 RNA-seq 中的 mRNA 和 lncRNA 作为结构化的小 ncRNA，包括 TruSeq 数据集中基本上不存在的 tRNA。8

2. 人类全细胞、外泌体、血浆和其他细胞外 RNA 的 RNA-seq。

快速处理时间（通过 PCR 步骤构建 RNA-seq 文库<5 小时）；需要少量 RNA（低 ng 范围）；全面的转录谱，包括 mRNA 和 lncRNA 以及小 ncRNA，包括 tRNA、pre-miRNA 和其他结构化小 ncRNA 的全长读数；不需要RNA连接酶；与传统方法相比，偏差更少、效率更高、链特异性更高。7、8、15

3. 高度结构化和/或高度修饰的 RNA 模板的 RNA-seq。

更高的热稳定性、持续合成能力和链置换使得获得 tRNA 和其他结构化/修饰的小 ncRNA 的全长、端到端 cDNA 成为可能，这些 ncRNA 对逆转录病毒 RT 具有抵抗力。4-9,12-15。

4. 在 RIP-seq、HITS-CLIP、irCLIP、CRAC、核糖体分析等方法中，通过 TGIRT® 模板切换构建 RNA-seq 文库。

快速处理时间（通过 PCR 步骤构建 RNA-seq 文库<5 小时）；需要少量 RNA（低 ng 范围）；不需要 RNA 连接酶，程序中的步骤更少，偏差更小，效率更高。1,10,11

5. 人血浆和大肠杆菌 基因组DNA 的ssDNA-seq 。

通过直接在 DNA 链的 3' 末端启动 DNA 合成，同时连接 DNA-seq 接头，无需末端修复、拖尾或连接，从而以更简单的工作流程捕获精确的 DNA 末端。能够分析核小体定位、转录因子结合位点、DNA 甲基化位点和起源组织。