Immagina Biotechnology核糖体研究试剂与特约代理经销商介绍

▍前言  

上海起发实验试剂有限公司作为Immagina Biotechnology特约代理经销商，面向国内科研用户提供RiboLace、LACEseq、PAGExt、AHARIBO等系列产品咨询与供货支持，协助实验室开展活性核糖体分析与翻译组研究。

▍一、公司介绍  

Immagina Biotechnology是从事核糖体分析、翻译组学与核酸建库技术研发的意大利生物公司，产品围绕活性核糖体分离、核糖体保护片段提取、小RNA及RPF文库构建、新生肽与RNA并行分析等方向形成试剂盒与配套方案。其技术路线以无抗体、无标签的亲和磁珠pull-down为基础，结合选择性建库流程，用于真核细胞系、原代细胞、组织样本中的翻译状态评估。

品牌主要覆盖三类实验需求：第一，从裂解液中分离正在翻译的活性核糖体，获得核糖体保护片段；第二，对RPF、小RNA或DNA文库进行PAGE纯化与高通量测序建库；第三，通过AHA掺入与点击化学，对活性核糖体上的新生肽及对应mRNA进行并行捕获和分析。相关产品按真核样本、低起始样本、低翻译速率样本、无凝胶建库流程等场景提供不同规格。

▍二、热门产品介绍  

① 产品一：RiboLace Mod. 1｜活性核糖体分离试剂盒  

◇ 货号：#RL001_Mod.1_12  

◇ 品名：RiboLace Module 1，12 reactions  

◇ 产品特点  

该试剂盒用于从真核细胞系或组织中分离活性核糖体，采用含嘌呤霉素结构的RiboLace Smart Probe，通过亲和磁珠完成pull-down，不依赖抗核糖体抗体，也不依赖GFP、FLAG等标签。试剂盒包含4℃、－20℃、－80℃分区组件，适用12次反应，可与PAGExt、LACEseq配套使用。对低起始裂解液有较好适应性，Mod.1资料给出的细胞裂解液输入范围为0.1—0.3总AU（Abs260nm）。  

◇ 存储条件  

未开封试剂盒按包装内标签分区存放：4℃组件置于4℃；－20℃组件置于－20℃；－80℃组件置于－80℃干冰到货后转入－80℃。运输可采用蓝冰与干冰组合，具体以当批物流与组件标签为准。开封后按单次用量分装相关酶与磁珠体系，避免反复冻融；核酸相关组分、磁珠重悬体系均按说明书标注温度执行。保质期资料通常按12个月管理，到货后以瓶身有效期为准。  

◇ 工作原理  

Ribo-seq类实验依靠核糖体对mRNA的占用产生保护片段。RiboLace的区别在于只富集“正在翻译"的核糖体：细胞或组织裂解后，加入Smart Probe，该探针含嘌呤霉素类似结构，可在活性核糖体A位相关状态中与新生肽链形成稳定关联；随后通过功能化磁珠进行亲和捕获，经磁分离获得active ribosome复合物。再经核酸酶消化，只保留被核糖体保护的短片段，即RPF。由于不采用抗体、不要求基因改造标签，该方法对天然样本、原代样本和瞬时处理样本更便于部署。  

◇ 使用方法  

1）样本裂解：贴壁细胞、悬浮细胞或组织按说明书选择细胞裂解液或组织裂解液，临用前补充脱氧胆酸钠、环己酰亚胺等附加试剂；用Nanodrop以补充后裂解液调零，测定裂解液AU。  

2）磁珠功能化：开箱按手册稀释并分装Smart Probe，将磁珠与探针孵育，建立亲和表面。  

3）核酸酶消化：向裂解液加入RNase I及RNase抑制剂，按优化时间消化，使游离RNA降解，仅保留核糖体保护片段。  

4）Pull-down：将功能化磁珠与消化后裂解液孵育，磁架分离，洗涤去除非特异核酸与蛋白。  

5）RNA提取：采用酸酚氯仿或柱提法回收RPF；如需片段核验，可进行变性PAGE观察。  

6）后续建库：RPF可接入PAGExt做胶回收，再用LACEseq完成NGS文库。

② 产品二：LACEseq｜RPF与小RNA建库试剂盒  

◇ 货号：#LS001-12，页面亦作#LS-001_12、LACEseq 12 rxns  

◇ 品名：LACEseq NGS Library Preparation Kit，12 reactions  

◇ 产品特点  

LACEseq用于核糖体保护片段及其他带3′磷酸末端小RNA的文库构建，适配Illumina平台，如MiSeq、NovaSeq 6000、NextSeq 1000/2000。试剂盒按12次反应配置，重点处理由核酸酶消化产生3′磷酸端的RPF，通过选择性连接降低非目标RNA进入文库的比例。与RiboLace分离的RPF衔接后，可完成从磷酸化、接头连接、环化、反转录到PCR扩增的建库流程。干冰运输，资料按12个月保质期管理。  

◇ 存储条件  

到货后按手册分区：－20℃组件放－20℃；－80℃组件放－80℃；引物、酶混合体系避免多次冻融。iUDI index plate如配合使用，按单独说明书存放，使用前置室温短暂解冻并低速离心，全程冰上操作。建库过程中涉及RNase-free水、无酶枪头、无RNase离心管；AMPure XP、RNA Clean系列纯化材料按各自供应商要求存放。  

◇ 工作原理  

常规RPF建库常需对RNA末端进行去磷酸或重新磷酸化处理后连接接头。LACEseq流程利用核酸酶切后RPF自身的3′磷酸特征，先用5′端磷酸化处理后，通过Linker与RPF 3′P端选择性连接；随后进行分子内环化，再反转录生成 cDNA，最后用带index的PCR引物扩增。由于第二轮环化动力学更倾向于目标片段，部分非磷酸化或 contaminants RNA的进入比例可降低，有利于提高RPF文库中有效读取占比。  

◇ 使用方法  

1）RPF质控：对RiboLace或其他流程获得的RPF进行浓度测定，用RNA Clean类试剂纯化。  

2）5′磷酸化：在缓冲体系中处理RPF 5′端，使后续连接反应具备合适末端。  

3）接头连接：加入LACEseq Linker，利用RPF 3′磷酸端进行选择性连接。  

4）环化：通过 intramolecular ligation 将线性接头-RPF产物转化为环状中间体，减少非目标线状RNA扩增。  

5）反转录：使用对应引物将环化RNA逆转录为cDNA。  

6）PCR与index：第一轮、第二轮PCR扩增，配合iUDI plate加入双index；用琼脂糖或PAGE初筛，用Agilent Bioanalyzer高敏DNA试剂盒评估主峰。  

7）测序：按Illumina平台上机，RPF通常关注28—30 nt附近分布，具体周期数依初始RNA量调整。

③ 产品三：PAGExt｜PAGE胶提取试剂盒  

◇ 货号：#KGE-002_12，资料亦作#KGE00-12、PAGE Gel Extraction Kit 24 rxns  

◇ 品名：PAGExt PAGE extraction kit，24 reactions  

◇ 产品特点  

PAGExt用于PAGE后的RNA片段与DNA文库提取，适用于RPF胶回收、小RNA纯化及NGS DNA文库洗脱。24次反应配置可覆盖RNA与DNA场景，配合RiboLace、LACEseq使用，可在变性聚丙烯酰胺电泳后切胶回收目标条带，减少过大、过小或非特异片段进入测序文库。产品含提取缓冲、过滤与消耗件，适合需要按片段长度严格筛选的核糖体分析实验。  

◇ 存储条件  

PAGExt按起发/产品信息以4℃渠道发货；部分液体或酶相关补充组件按标签要求可转－20℃存放。到货后核对外箱温度与箱内冷链指示，未使用组件不要常温久置；凝胶提取缓冲液避免污染，过滤柱类耗材按干燥、洁净条件存放。若与LACEseq同项目使用，PAGExt回收的RNA应重新评估完整性后再进入建库。  

◇ 工作原理  

RPF经核酸酶消化后长度集中，但不同细胞状态、核酸酶浓度和裂解条件会造成片段分布偏移。将RPF或DNA文库进行变性PAGE分离后，目标条带在凝胶中按碱基数目定位；PAGExt通过胶片破碎、缓冲液浸提、过滤收集与浓缩，把目标RNA/DNA从聚丙烯酰胺基质中释放出来。相比直接全片段建库，胶提取可去掉游离接头、降解RNA、过长非特异性DNA，提高文库片段均一性。  

◇ 使用方法  

1）制胶与电泳：按RPF目标范围制备变性PAGE，例如关注约28—34 nt片段时设置相应胶浓度与marker；将RiboLace提取的RPF或LACEseq中间产物加样。  

2）染色与切胶：用与RNA兼容的染色方式定位目标带，避免强固定导致回收率下降；按标准尺寸切下目标胶条。  

3）胶片处理：将胶条破碎或按手册匀浆，加入PAGExt提取缓冲，充分振荡浸提。  

4）过滤回收：通过配套过滤柱或离心装置分离胶渣，收集含核酸洗脱液。  

5）浓缩与清洗：用乙醇沉淀、柱纯化或试剂盒配套浓缩步骤获得RNA/DNA。  

6）建库衔接：RNA RPF回到LACEseq做后续连接、环化；DNA文库可直接PCR质控或上机前定量。

▍三、解决实验中的哪些问题  

1）传统ribosome profiling难以区分“活跃"与“静止"核糖体。RiboLace通过活性核糖体亲和pull-down，主要获得正在翻译的核糖体信号，便于研究翻译起始、延伸、应激调控与蛋白合成速率。  

2）低起始样本、原代细胞、临床组织等物料有限，常规方法可能因输入量不足导致RPF产量低。RiboLace Mod.1可按0.1—0.3 AU细胞裂解液输入优化；XL版本增加磁珠、对照与probe，适合低翻译速率或难处理样本。  

3）RPF建库常受总RNA、降解片段、游离接头干扰。LACEseq利用3′磷酸端做选择性连接，PAGExt再做长度筛选，可降低非目标读取比例，改善文库单一性与后续比对质量。  

4）翻译组只测RPF可能忽略新生蛋白与mRNA对应关系。AHARIBO用AHA替代甲硫氨酸掺入新生肽，DBCO磁珠通过点击化学捕获活性核糖体复合物，可同时分析translatome RNA与新生肽，适合翻译效率、应激翻译、药物作用研究。  

5）无凝胶流程需求下，GF001 All-in-One RiboLace Gel Free可减少PAGE步骤，从活性核糖体pull-down到NGS文库一体化，适合希望缩短手工操作、提高批次一致性的实验室。

▍四、购买本品牌产品常见疑问与解答  

问1：RiboLace是否必须构建标签细胞系？  

答：RiboLace Mod.1、Pro、XL及Gel Free方案均按无抗体、无标签设计，使用Smart Probe与磁珠亲和分离，常规真核细胞系、组织样本无需预先导入GFP、FLAG等标签。  

问2：RPF建库选LACEseq还是普通小RNA建库？  

答：若RPF由RiboLace或产生3′磷酸末端的核酸酶流程获得，LACEseq的选择性连接更匹配；若样本同时包含多种小RNA且末态不一致，应先统一磷酸化状态并按手册验证。  

问3：PAGExt是否只用于RNA？  

答：PAGExt资料定位为RNA片段与DNA文库PAGE提取，24次规格可分配用于RPF RNA与后续DNA文库回收，具体次数按切胶体积、片段数量和回收流程安排。  

问4：低翻译样本用哪款更合适？  

答：原代细胞、低代谢组织、药物处理后翻译受抑样本，可评估RiboLace XL（#RL001_XL）或All-in-One XL套装；其增加磁珠、对照和probe量，便于按样本翻译状态微调pull-down规模。  

问5：产品运输与到货验收注意什么？  

答：RiboLace系列多含4℃、－20℃、－80℃组件，可蓝冰加干冰到货；LACEseq干冰运输；PAGExt按4℃渠道发货。到货核对箱单货号、批号、温度指示，未按标签温度存放的组件不建议直接使用。  

问6：组织样本如何准备？  

答：新鲜组织尽快用预冷PBS去除血液，快速切碎并进入补充全的裂解体系；若不能立即裂解，按RiboLace手册低温保存，避免反复冻融。不同组织硬度、RNase活性和翻译状态会影响AU输入，建议先做小规模裂解与AU测定。  

问7：CHX是否必须使用？  

答：RiboLace可在含或不含环己酰亚胺条件下运行。CHX有助于稳定某些细胞状态的核糖体位置，但可能在起始密码子附近产生特定周期性偏差；实验设计时应根据研究目标选择，并在方法部分统一处理条件。  

问8：LACEseq搭配哪种index plate？  

答：可按反应数量选择iUDI LACEseq plate，如#LS-UDI-012A-12、012B-12、012C-12、012D-12或24样本板#LS-UDI-002-24等。多重混样前按Illumina index兼容性检查，不跨行混池，避免index串扰。  

问9：AHARIBO与RiboLace如何选？  

答：只关注RPF与翻译位置，选RiboLace+LACEseq+PAGExt；同时关注新生肽身份、翻译组RNA与肽段对应关系，选AHARIBO TranslatoME RNAseq（#TR001_12）或相关core kit，并按细胞培养AHA掺入流程执行。  

问10：科研用途限制如何把握？  

答：Immagina上述RiboLace、LACEseq、PAGExt、AHARIBO等产品资料均标注For Research Use Only，不用于临床诊断、治疗或体外诊断试剂开发；如涉及转化医学项目，应按所在机构伦理与用途合规审查。

▍五、产品选型简表思路

◇ 真核细胞系常规活性核糖体：RiboLace Mod.1 #RL001_Mod.1_12 → PAGExt #KGE-002_12 → LACEseq #LS001-12。  

◇ 低起始、原代、低翻译速率：RiboLace XL #RL001_XL，或RiboSeq XL All-in-One #RS-012XLs。  

◇ 希望减少PAGE操作：RiboLace Gel Free #GF001-12，内置active ribosome pull-down与LACEseq式建库组件。  

◇ 新生肽与RNA并行：AHARIBO TranslatoME #TR001_12，按AHA、sBlock、DBCO磁珠与RNA/蛋白分支执行。  

◇ 多重测序index管理：iUDI LACEseq plate按012A—012D或24样本板配置，配合LACEseq主试剂盒。

▍六、实验部署建议  

1）先明确问题：是看全转录本翻译覆盖、起始位点偏移、特定刺激下蛋白合成变化，还是看新生肽组成。目标不同，样本数、裂解输入、是否做PAGE、是否做AHARIBO均不同。  

2）统一处理条件：同一批Ribo-seq样本应统一CHX、裂解缓冲、核酸酶时间与pull-down体积；不同细胞系输入AU不同，不可只按蛋白浓度等同加样。  

3）设置对照：RiboLace XL含参考细胞沉淀对照；普通Mod.1可另设空白磁珠、无probe、无核酸酶对照，用于判断非特异性RNA结合。  

4）建库质控：LACEseq完成后用Bioanalyzer高敏DNA试剂盒看主峰；PAGExt切胶回收后用Nanodrop或Qubit定量，避免低量RPF过度PCR导致重复偏好。  

5）数据解释：活性核糖体信号反映翻译占用，不等于最终蛋白总量；与RNA-seq、蛋白组、AHARIBO新生肽结果联合分析会更完整。

▍七、采购建议

上海起发实验试剂有限公司作为Immagina Biotechnology特约代理经销商，可提供上述货号对应的产品资料、说明书版本、到货温控验收建议与售后流转支持。实验室在采购前可先提供样本类型、反应次数、是否需PAGE、是否需Illumina index，由代理渠道核对货号与套装，减少错配。所有试剂盒按研究使用用途管理，到货后以瓶身标签、COA、电子版说明书为准执行存储与操作。

关键词：核糖体分析、翻译组学、RPF建库、活性核糖体分离、RiboLace试剂盒、LACEseq文库、PAGExt胶回收、AHARIBO新生肽、Illumina核糖体温控、真核细胞翻译效率、原代细胞ribosome profiling、低起始RPF方案、无标签核糖体pull-down、PAGE小RNA提取、iUDI双索引建库、意大利Immagina代理、上海起发实验试剂、转录组与翻译组联合、药物处理翻译调控、科研测序前处理耗材

更多产品信息，请联系中国区域代理商：上海起发实验试剂有限公司

（注：本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，具体以品牌信息文档为准。）

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