JPT Peptide多肽池：抗原特异性T细胞检测要点

JPT Peptide（简称JPT）以多肽池与多肽合成试剂为核心产品线，PepMix系列常用于抗原特异性T细胞刺激与免疫监测。本文针对ELISpot信号偏弱、背景偏高、单一蛋白表位覆盖不足等常见实验问题，说明相关货号的选型、溶解、保存与结果判读要点。

一、公司与业务介绍

1、业务范围

其业务围绕多肽化学合成与多肽试剂供应展开，覆盖免疫学研究、蛋白质组学分析与药物发现早期研发三类场景。除标准货架产品外，公司承接从序列设计、合成纯化到质检放行的定制多肽项目。合成规模按微克级、毫克级与克级分档，可按实验用量选择对应包装。

针对细胞治疗与疫苗开发的早期工艺需求，业务范围还覆盖 pre-GMP 级别的多肽物料与配套文件。此类物料按项目约定的纯度、批记录与放行标准执行。

2、产品线构成

目前，产品线由多肽池、多肽文库、多肽微阵列、多肽合成与配套检测服务构成。PepMix系列是肽池品类的主力，包含蛋白全长重叠肽池、Ultra系列、对照肽池与定制肽池，用于抗原特异性T细胞刺激与免疫监测。

多肽文库涵盖PepTrack肽库、酶底物套装、SpikeTides定量参考肽、BioTides生物素化肽与PTM参考标准，对应蛋白酶活性分析、质谱定量与修饰位点研究。多肽微阵列以PepStar与PepSpots为代表，可在有限样本条件下完成表位扫描与抗体谱分析。

多肽合成服务提供从微克级到克级的定制合成，覆盖标记肽、环肽与修饰肽。配套服务包括多肽ELISA方法建立、肽序列优化与生物信息学辅助的表位筛选。

3、质量管理体系

质量管理体系按 ISO 9001:2015 标准运行，并接受年度审核与认证复核。体系文件覆盖标准操作规程、工艺指令与偏差处理流程，批次记录可追溯。

每条肽在合成后独立纯化，并以液相色谱-质谱分析确认身份与纯度，分析证书与图谱随货提供。肽池在单肽质控完成后还会以整池形式再次检测，以减少缺失肽带来的非特异刺激。

生产过程执行无动物源成分政策，并采用低生物负载工艺，以降低内毒素对细胞实验的干扰。

4、与授权代理商的合作关系

上海起发实验试剂有限公司是JPT Peptide的授权代理商，负责国内用户的货号核对、规格确认、订购与交付衔接。代理渠道沿用品牌方的产品编号与批次文件，按货号即可对应到具体肽池、肽库或微阵列产品。

技术手册、分析证书与批次记录随货同步，涉及批次疑问时可由代理商对接品牌方技术团队核查。定制肽池的序列、池格式与纯度等级需在订购前逐项确认，以免与货架产品混淆。

二、热门产品介绍

1、PM-PP65-ULTRA｜PepMix Human CMV (pp65) Ultra

① 品名与货号：产品名称为PepMix Human CMV (pp65) Ultra，货号PM-PP65-ULTRA，包装规格为每条肽25 µg（约15 nmol），可满足2.5×10^8细胞的刺激用量。该货号对应Ultra系列的人巨细胞病毒pp65肽池，订购时需与常规货号PM-PP65-1区分。

② 产品特点：肽池由185条肽组成，序列沿HCMV pp65（65 kDa磷蛋白）的表位区段排布。纯度等级为Development Grade，每条肽经HPLC/MS检测纯度高于70%，折算平均纯度约85%。产品以冻干形式装于玻璃瓶，执行无动物源成分政策，批间一致性由单肽质控与整池复检控制。

③ 存储条件：未溶解的冻干粉应置于-20℃及以下保存，依据现行版《PepMix多肽池使用手册》（2025年9月版），在该温度下自购买日起可稳定至少6个月。溶解会降低长期稳定性，储备液需立即分装并置于-20℃及以下。

④ 工作原理：肽池中的肽段长度为15个氨基酸，相邻肽段重叠11个氨基酸，沿pp65序列连续排布。短肽无需经抗原提呈细胞对外源蛋白的摄取与加工，可直接与HLA分子结合并被特异性T细胞识别。由于覆盖整个蛋白序列，刺激不依赖单一HLA型别，适合HLA背景未知的样本。

⑤ 使用方法：按每瓶50 µL无水DMSO的比例室温溶解，得到储备液后立即分装。实验前用培养基稀释为双倍工作液，与等体积细胞悬液混合，每条肽终浓度不低于1 µg/mL。ELISpot体系在37℃、5% CO2条件下孵育至少16小时，ICS体系孵育6至16小时，刺激体系中DMSO终浓度控制在1%（v/v）以下。

⑥ 适用检测场景：适用于IFN-γ ELISpot、细胞内因子染色、细胞毒性测定、淋巴细胞增殖与体外T细胞扩增。也用于树突状细胞负载、疫苗免疫原性评价与移植后病毒特异性免疫监测。

2、PM-SARS2-S-MUT-1｜PepMix SARS-CoV-2 (S-MUT)

① 品名与货号：产品名称为PepMix SARS-CoV-2 (S-MUT)，货号PM-SARS2-S-MUT-1，每条肽25 µg（约15 nmol）。该货号为Spike蛋白D614G突变位点的定点肽池，与全长Spike肽池货号不同，选型按研究目的区分。

② 产品特点：肽池由4条肽组成，序列来自SARS-CoV-2 Spike糖蛋白，采用15mer、11个氨基酸重叠的扫描方式，覆盖D614G突变区域。纯度等级为Research Plus Grade，每条肽经HPLC/MS确认为主产物，折算平均纯度约70%。

③ 存储条件：冻干粉在-20℃及以下保存，稳定期与常规PepMix肽池一致，自购买日起至少6个月。溶解后的储备液应分装低温保存，不宜反复冻融。

④ 工作原理：4条肽集中在D614G位点附近，突变后的氨基酸序列直接体现在肽段中。肽段与MHC分子结合后，可被识别突变表位的T细胞克隆识别，从而把针对该位点的反应与全长抗原的总体反应区分开。

⑤ 使用方法：溶解与分装方式与常规PepMix一致，25 µg/条肽的包装加50 µL无水DMSO。使用时按每条肽1 µg/mL的终浓度配制双倍工作液；若与全长Spike肽池平行检测，两组应使用相同的细胞数、孵育时间与复孔数。

⑥ 适用检测场景：适用于变异株免疫逃逸研究、疫苗接种后交叉反应评价、突变位点特异性T细胞检测，以及不同流行株序列差异的免疫学验证。

3、PM-CEFX-4｜CEFX Ultra SuperStim Pool MHC-I Subset

① 品名与货号：产品名称为CEFX Ultra SuperStim Pool MHC-I Subset，货号PM-CEFX-4，规格为每条肽15 nmol（约25 µg），可满足2.5×10^8细胞的刺激用量。该货号为MHC-I亚型阳性对照肽池，同系列另设MHC-II亚型货号PM-CEFX-3。

② 产品特点：肽池由80条已知表位肽组成，覆盖多种HLA亚型与不同病原体来源的抗原，包括破伤风梭菌、柯萨奇病毒B4、流感嗜血杆菌、幽门螺杆菌、人腺病毒5、单纯疱疹病毒1型与2型、水痘-带状疱疹病毒、EB病毒、人巨细胞病毒、人疱疹病毒6型、人乳头瘤病毒、甲型流感病毒、JC多瘤病毒、麻疹病毒、风疹病毒、弓形虫与痘苗病毒。纯度等级为Development Grade，每条肽经HPLC/MS检测纯度高于70%，平均约85%。

③ 存储条件：冻干粉置于-20℃及以下保存，稳定期与常规PepMix肽池一致。溶解后按单次用量分装，避免反复冻融。

④ 工作原理：80条表位肽各自对应已知的MHC-I限制性表位，混合后可在不同HLA型别样本中提供广谱刺激。作为阳性对照，其作用是确认PBMC中存在可被刺激的T细胞，并验证培养基、抗体与显色体系工作正常。

⑤ 使用方法：按每条肽1 µg/mL的终浓度配制，作为阳性对照加入复孔。同一块板上需同时设置阴性对照，即含等量DMSO的培养基，阳性与阴性对照各设至少两个复孔。

⑥ 适用检测场景：适用于ELISpot与ICS的阳性对照、跨人群样本的体系质控、多中心实验的刺激条件校准，以及冻存PBMC复苏后的功能评估。

三、实验问题与对应解决

1、ELISpot孔背景偏高、斑点连片，是多肽池没溶好吗？

① 痛点表现：阴性孔也出现散在斑点，阳性孔斑点边界模糊，斑点计数与背景难以区分。

② 成因：肽未充分溶解、DMSO终浓度超过1%、每条肽终浓度过高，或池中少量纯度不足的肽段引起非特异刺激，都会抬高背景。

③ 对应货号：PM-PP65-ULTRA，每条肽经HPLC/MS质控，纯度高于70%，整池再做一次复检。

④ 可观察的改善：阴性孔斑点减少，阳性孔斑点更易计数，复孔之间的差异收窄。

2、抗原特异性T细胞刺激信号弱、阳性孔斑点少怎么办？

① 痛点表现：PBMC经抗原刺激后斑点稀少，低频次特异性T细胞难以检出。

② 成因：以重组蛋白或病毒裂解液刺激时，抗原因需经外源加工途径而效率受限；单一表位肽覆盖的HLA型别有限。

③ 对应货号：PM-PP65-ULTRA，185条15mer肽、11个氨基酸重叠，沿pp65序列连续排布。

④ 可观察的改善：相同细胞数与孵育时间下，斑点数量增加，SFC读数上升。

3、换了一批PBMC，阳性对照孔时有时无怎么排查？

① 痛点表现：不同供体来源的PBMC，阳性对照孔出斑差异明显，实验是否成立难以判断。

② 成因：单一或少数表位肽只覆盖部分HLA型别，供体HLA背景变化后刺激效率下降。

③ 对应货号：PM-CEFX-4，80条已知表位肽覆盖多种HLA亚型与多种病原体来源抗原。

④ 可观察的改善：跨供体样本的阳性对照孔信号趋于稳定，批次之间可做平行比较。

4、只做单一蛋白，担心漏掉跨肽段边界的表位怎么办？

① 痛点表现：表位落在两条相邻肽段的连接处，单一条15mer无法完整呈现。

② 成因：肽段重叠长度不足，核心序列未被相邻肽共享，边界表位因此漏检。

③ 对应货号：PM-PP65-ULTRA，采用11个氨基酸重叠的肽段设计。

④ 可观察的改善：相邻肽段共享核心区，边界表位可在至少一条肽中被完整覆盖。

5、想区分疫苗株与流行变异株的T细胞反应怎么做？

① 痛点表现：全长抗原池只给出总体反应，无法定位单个氨基酸替换带来的影响。

② 成因：Spike蛋白D614G等位点变化会改变表位序列，全长池中突变肽的占比有限。

③ 对应货号：PM-SARS2-S-MUT-1，4条肽对应Spike的D614G突变区域。

④ 可观察的改善：与全长Spike池平行检测时，可观察到突变相关孔的信号差异。

6、临床样本细胞数少，肽池用量怎么控制？

① 痛点表现：冻存PBMC复苏后回收细胞有限，一个包装要覆盖多组刺激条件。

② 成因：25 µg/条肽的包装按2.5×10^8细胞设计，多抗原并行与复孔设置会放大消耗。

③ 对应货号：PM-PP65-ULTRA与PM-CEFX-4，均按每条肽的质量标示，便于按孔计算。

④ 可观察的改善：200 µL体系、1 µg/mL终浓度时，每条肽每孔用量约0.2 µg，单瓶可支撑多组条件。

四、常见疑问与解答

1、PepMix多肽池的货号怎么查？

货号印在瓶身标签上，并出现在分析证书与产品说明书中，PepMix系列货号以PM开头。核对时应把蛋白名称、突变位点与货号一起比对，避免同名不同源的产品混用。标签磨损时，可用批次号通过授权代理商查询对应的货号与规格。

2、多肽池收到后应该如何储存，运输途中需要低温吗？

冻干粉应在-20℃及以下保存，按现行版使用手册，在该温度下自购买日起可稳定至少6个月。运输环节的温度与包装按产品属性安排，具体条件以随货说明为准。收到后应先检查瓶体是否完好、冻干饼是否移位，再转入低温环境。

3、溶解后的多肽池开瓶后还能放多久？

溶解会降低肽池的长期稳定性，说明书中未给出统一的开瓶后保存期限。常规做法是按单次用量分装后置于-20℃及以下，并避免反复冻融。已用培养基稀释到工作浓度的溶液应当次使用，不宜过夜后再用于刺激。

4、多肽池用什么溶解，DMSO终浓度控制在多少？

用无水DMSO在室温下溶解，每条肽25 µg的包装通常加50 µL即可。需要更低储备浓度时，可按说明书比例增加DMSO体积。刺激体系中DMSO终浓度应低于1%（v/v），并设置含等量DMSO的阴性对照。

5、多肽池能直接加入细胞培养孔吗？

冻干粉不能直接加入培养孔，需先配成DMSO储备液，再用培养基稀释为双倍工作液。双倍工作液与等体积细胞悬液混合后，每条肽终浓度不低于1 µg/mL。加样后在37℃、5% CO2条件下孵育，ELISpot过夜，ICS为6至16小时。

6、ELISpot做完后斑点怎么判读，多少算阳性？

用读板仪计数斑点，与含等量DMSO的阴性对照孔比较，阳性对照孔用于确认体系有效。阳性判定标准应由实验室预先设定并在批次间沿用，不同实验之间不宜直接比较绝对斑点数值。斑点形态、背景与复孔离散度也应一并记录。

7、同一份样本做ICS和ELISpot，肽池浓度要调整吗？

两种体系常用终浓度均为每条肽1 µg/mL，差异主要在细胞数与孵育时间。ICS每孔约20万细胞、刺激6至16小时；ELISpot每孔10万至30万细胞、过夜至少16小时。复孔数与刺激体积按孔型调整，储备液分装后分别取用。

8、多肽池与重组蛋白抗原有何区别？

重组蛋白需经抗原提呈细胞摄取与加工，才能进入MHC提呈途径；肽池中的短肽可直接结合HLA分子。因此肽池不受抗原加工效率限制，全长重叠池也不依赖单一HLA型别。其局限是只覆盖已知序列，不能反映翻译后修饰。

9、通过授权代理商订购需要提供哪些信息？

需提供目标蛋白名称或货号、包装规格、所需批次与用途说明，代理商据此核对库存与报价。定制肽池还需提供序列、池格式、纯度等级与单条肽量。货号与规格确认后再下单，可减少错发与重复采购。

10、货期一般多久，出现质量问题怎么处理？

品牌方标注的标准交付时间为2至5天，实际货期受库存、排产与运输安排影响，以订购时确认为准。收到后如发现包装破损、冻干粉异常或批次文件缺失，可凭货号与批次号由代理商提交核查。涉及纯度或身份的问题，可调取该批次的分析证书与HPLC-MS图谱比对。

更多产品信息，请联系中国区域代理商：上海起发实验试剂有限公司

（注：本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，具体以品牌信息文档为准。）

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