美国Lucigen特约代理经销商-上海起发

① 公司介绍

美国Lucigen专注于分子生物学酶、感受态细胞、核酸提取与纯化、克隆系统、体外转录、下一代测序建库及转座突变等科研试剂开发。产品面向基因克隆、CRISPR筛选、噬菌体展示、RNA研究、NGS样本处理、蛋白表达与合成生物学等实验场景。品牌相关产品可作为LGC Biosearch Technologies业务组合的一部分进行供应，覆盖从样本裂解、核酸纯化、酶学处理到载体构建与文库扩增的工作流程。

Lucigen提供感受态细胞、限制性及修饰酶、连接酶、聚合酶、核酸酶、快速提取液、克隆载体与建库试剂盒等品类，可根据常规质粒克隆、困难模板克隆、大片段组装、低起始量核酸处理等需求提供对应试剂。上海起发实验试剂有限公司作为Lucigen特约代理经销商，负责产品咨询、货期确认、合规报价与技术资料对接。

② 核心优势

⑴ 产品矩阵较完整：从核酸提取、酶学处理、感受态转化到NGS建库均有对应试剂，便于按实验流程统一选型。

⑵ 困难模板支持能力：提供面向重复序列、反向重复序列、慢病毒载体、CRISPR文库及大片段_insert的稳定克隆方案，减少非预期重组与文库多样性损失。

⑶ 快速样本处理方案：QuickExtract等提取液采用单管裂解思路，适配小样本、批量样本与部分自动化前处理需求。

⑷ 酶与缓冲体系规范：RNase R、连接酶、核酸酶等产品配备反应缓冲、单位定义与质控说明，便于建立可重复实验条件。

⑸ 感受态规格清晰：化学感受态与电转化感受态按DUO、SOLO等包装提供，配套Control DNA与Recovery Medium，便于文库转化与常规克隆分别选型。

⑹ 代理供应与技术对接：上海起发实验试剂有限公司可提供货号核对、批次信息、使用手册、订购周期与售后疑问处理，减少因货号混淆导致的采购误差。

③ 热门产品介绍

⑶－1 Endura电转化感受态细胞

◇ 产品品名：Endura Electrocompetent Cells

◇ 真实货号：60242-1，规格12 rxns（DUOs）；60242-2，规格24 rxns（DUOs）

◇ 产品特点：面向不稳定序列、反向重复序列、慢病毒文库及CRISPR GeCKO等 pooled library构建提供电转化细胞。DUO包装每管50μL，可用于两次25μL电转反应；随盒包含Control pUC19 DNA与Recovery Medium。对含倒重复、易重组insert的质粒，可提供比常规克隆菌株更稳定的转化与扩培条件。

◇ 存储条件：收货后立即于-80℃储存，避免反复冻融；短期运输采用干冰。Recovery Medium可按单独货号80026-1订购，不同包装可按说明书标注温度存放。

◇ 工作原理：Endura通过菌株背景优化，降低含不稳定二级结构、重复区域或慢病毒来源序列在宿主内发生非预期重组的概率。电转化前细胞经低温与低电导条件处理，在高压脉冲下提高膜通透性，使质粒进入细胞；随后用Recovery Medium恢复代谢，再进行抗性筛选与文库扩培。

◇ 使用方法：

1）从-80℃取出Endura电转细胞，置于冰上解冻约10至15分钟，轻弹混匀，避免37℃放置或反复冻融。

2）预冷0.1 cm电转杯与1.5 mL离心管；若DNA含盐较高，先纯化并用纯水或低离子缓冲液重悬。

3）取25μL感受态加入预冷管，加入适量质粒或连接产物；文库构建可按方案使用25 ng质粒或按连接产物体积优化，避免过多样本导致电弧。

4）将混合液移入0.1 cm电转杯，避免气泡；按电转仪建议参数操作，常见参考条件为1.8 kV、600Ω、10μF，具体以所用电转仪与protocol为准。

5）电击后10秒内加入Recovery Medium，0.1 cm杯可加约975μL至1 mL；若按文库扩增方案，可补加恢复液至总恢复体积满足覆盖度需求。

6）37℃、约225至250 rpm复苏60分钟；取适量涂含相应抗性的LB Lennox平板，37℃过夜。

7）文库扩增按目标覆盖倍数计算电转次数与培养体积，扩培后提质粒或继续下一轮建库。

⑶－2 QuickExtract DNA Extraction Solution

◇ 产品品名：QuickExtract DNA Extraction Solution 1.0

◇ 真实货号：QE09050，50 mL；同系列5 mL货号QE0905T，植物样本货号QEP70750，FFPE货号QEF81050，RNA提取货号QER090150

◇ 产品特点：单管裂解获取PCR-ready基因组DNA，多数样本3至8分钟完成；不涉及离心柱、有机溶剂与多步洗涤。适用于小鼠尾尖、口腔细胞、组织培养细胞、毛囊、羽毛、斑马鱼组织、细菌筛查及部分病毒RNA前处理。

◇ 存储条件：储存于无自动除霜循环的-20℃冰箱；尽量减少冻融次数。解冻后可分小份使用，短期可于4℃存放约1个月，长期仍建议-20℃保存。

◇ 工作原理：试剂通过去污剂、蛋白酶及热处理协同作用裂解细胞或病毒颗粒，释放DNA/RNA并降解部分抑制PCR的蛋白与杂质。热处理后上清可直接作为PCR、RT-PCR或下游酶反应的模板，省去柱纯化与有机抽提。

◇ 使用方法：

1）按样本类型取适量QuickExtract加入PCR管；固体小组织可先剪碎或直接加入裂解液。

2）通用组织/细胞DNA快提：加入QuickExtract后按样本难度进行热处理，多数哺乳动物小组织、细胞沉淀可采用65℃数分钟至95℃数分钟的组合，具体时间按组织量与手册调整，总体控制在3至8分钟区间。

3）冷却后取适量上清作为PCR模板；若样本杂质较多，可离心取上清或减少模板量优化扩增。

4）病毒RT-qPCR简易前处理示例：鼻咽拭子运输液与QuickExtract按约1:1混合，如20μL样本加20μL试剂；95℃孵育5分钟；冰上冷却后取部分反应液加入RT-qPCR体系，示例取总反应10%体积，如50μL体系用5μL提取液。该示例仅用于科研方法建立，不替代临床批准流程。

5）难裂细菌可配合Ready-Lyse溶菌酶预处理，再进入QuickExtract流程。

⑶－3 Ribonuclease R（RNase R）

◇ 产品品名：Ribonuclease R，E. coli

◇ 真实货号：RNR07250，250 U，20 U/μL；同系列可按需求确认更大包装

◇ 产品特点：镁依赖3′→5′外核糖核酸酶，消化大多数线性RNA，不消化环状RNA、lariat及部分特殊结构；适用于circRNA富集、可变剪切研究、内含体cDNA构建、基因表达样品处理与线性RNA去除。

◇ 存储条件：于无自动除霜循环的-20℃储存。酶液存储缓冲为50%甘油，含50 mM Tris-HCl pH7.5、100 mM NaCl、0.1 mM EDTA、0.1% Triton X-100、1 mM DTT；10×反应缓冲为0.2 M Tris-HCl pH8.0、1 M KCl、1 mM MgCl2。避免多次冻融。

◇ 工作原理：RNase R沿RNA 3′端向5′端逐个水解核苷酸。线性RNA被持续降解为小分子核苷酸，环状RNA因无自由3′末端而不被该酶持续水解，lariat仅在分支点前被修剪。经处理后可提高circRNA在总RNA中的相对比例，用于后续RT-PCR、qPCR、测序或cDNA文库构建。

◇ 使用方法：

1）取总RNA定量，按参考用量配置反应；RNR07250常用参考为3至4 U/μg总RNA，具体按物种、RNA状态与目标circRNA调整。

2）示例20μL体系：RNA 5μg，10×RNase R Reaction Buffer 2μL，RNase R 20U/μL按3至4U/μg加入，RNase-free水补至20μL；若底物含EDTA，可补MgCl2至终浓度不超过1mM。

3）37℃孵育10至30分钟；常规circRNA富集可先试10至30分钟，复杂样本可延长但避免过长时间导致部分环状分子受损。

4）如需终止反应，可65℃加热20分钟灭活；后续PCR或qPCR应设RNase R未处理对照，内参不宜仅用线性ACTB/GAPDH，可比较circular primer与convergent/divergent primer结果。

5）纯化回收按常规RNA清洁试剂盒进行；若直接进行RT，需确认缓冲盐浓度不抑制逆转录酶。

④ 解决实验中哪些问题

⑴ 不稳定序列重组：含倒重复、慢病毒LTR附近区域、sgRNA池或反向重复片段在传统克隆菌中易发生缺失、重排；Endura可提供相应电转或化学转化方案，降低非预期重组。

⑵ CRISPR文库覆盖不足：文库电转后克隆数偏低、复苏差、扩培多样性下降；通过Endura高电转效率、配套Recovery Medium及按覆盖倍数计算电转次数，可改善入库与扩增稳定性。

⑶ 小样本核酸提取繁琐：小鼠基因型、临床拭子初筛、动植物小组织、批量菌株筛查若使用柱提，步骤多、成本高；QuickExtract单管热处理可减少离心、有机试剂与人员操作差异。

⑷ 环状RNA检测背景高：总RNA中线性mRNA、rRNA、部分snRNA会干扰circRNA qPCR或测序；RNase R处理可选择性去除大量线性RNA，保留环状分子用于验证或富集。

⑸ 困难酶学反应重复性差：连接、外切、逆转录或RNA建库受缓冲盐、Mg2+、EDTA影响；按Lucigen给定酶浓度、缓冲组成与单位定义配置体系，有助于减少批间偏差。

⑹ 多步骤采购分散：提取、酶处理、感受态、建库分别找不同供应商，易出现兼容问题；通过同一品牌流程化选型，并由上海起发实验试剂有限公司统一核对货号与批次，可降低衔接成本。

⑤ 购买此公司产品常见疑问与解答

Ｑ1：货号如何确认，避免买错规格？

Ａ：先提供实验类型、样本、反应次数与现有protocol。例如Endura电转写60242-1或60242-2，QuickExtract 50mL写QE09050，RNase R 250U写RNR07250；上海起发实验试剂有限公司按书面货号二次核对后报价。

Ｑ2：感受态到货后能否分装？

Ａ：电转细胞建议按原管使用，避免反复冻融与室温放置；若必须分装，应在冰上操作并使用无菌预冷管，分装后尽快回-80℃，并评估分装后转化效率。

Ｑ3：QuickExtract能全替代柱提试剂盒吗？

Ａ：对PCR、基因分型、筛查、部分RT-qPCR前处理可替代；对高纯度NGS文库、酶反应敏感实验或杂质较多样本，仍需评估柱提或额外纯化。QE09050定位为快速获取PCR-ready模板，不等于所有高纯场景都适用。

Ｑ4：RNase R消化后还有线性RNA残留怎么办？

Ａ：可提高酶量、延长37℃时间、降低底物EDTA影响并补MgCl2至合适范围；同时检查RNA是否降解、体系体积与缓冲比例是否正确。若目标circRNA对核酸酶敏感，应避免过度消化。

Ｑ5：CRISPR文库电转用多少Recovery Medium？

Ａ：Endura套装每反应通常配1mL Recovery Medium；部分GeCKO或pooled library方案建议每电转恢复总液量约2mL，不足时可单独订购80026-1补充。

Ｑ6：产品是否可用于临床诊断？

Ａ：Lucigen相关试剂多标注For Research Use Only，不用于人类诊断程序；涉临床检测需另选获批产品与合规流程。

Ｑ7：进口试剂货期与冷链如何确认？

Ａ：订货前由上海起发实验试剂有限公司确认现货、在途与进口周期；感受态、酶液按干冰或冷冻条件发运，收货后立即按说明书温度存放。

Ｑ8：不同品牌连接产物能否用Endura电转？

Ａ：可以，但需控制盐浓度与体积；高盐或大型连接体系建议纯化后电转，避免电弧并提升转化稳定性。

Ｑ9：RNase R与RNase H、RNase A区别是什么？

Ａ：RNase R为3′→5′外核糖核酸酶，主攻线性RNA降解与circRNA富集；RNase H水解RNA-DNA杂交链中的RNA；RNase A主要切单链RNA特定位点。三者应用不互换。

Ｑ10：大批量提取和建库如何降低成本？

Ａ：可按样本数选用QE09050 50mL或更大装量；文库构建按覆盖度反推电转反应数，避免过量购买感受态；酶类按单位而非仅按体积核算，由代理提供规格对照。

⑥ 代理订购说明

科研用户可向上海起发实验试剂有限公司提交Lucigen产品货号、规格、数量与用途，由专员核对目录、效期、运输条件与进口资质。对于Endura、QuickExtract、RNase R等常备品类，可提前确认库存与替代规格；对于NGS建库、体外转录、EZ-Tn5、MasterPure、Ampligase、CircLigase等扩展品类，可按实验方案做组合报价。

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更多产品信息，请联系中国区域代理商：上海起发实验试剂有限公司

（注：本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，具体以品牌信息文档为准。）

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